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犬瘟热病毒基因疫苗与重组犬腺病毒的构建及其实验免疫研究

鞠会艳  
【摘要】:犬瘟热(CD)是一种在世界范围内分布的对犬、毛皮经济动物乃至野生动物危害严重的急性、病毒性传染病。防治CD的有效途径是疫苗接种,虽然灭活疫苗和弱毒疫苗在控制CD发生上起了一定作用,但随着使用的广泛,也发现了许多缺陷,因此,必须寻找更安全、有效、实用的新型疫苗。基因疫苗和重组活载体疫苗是近年来研究比较热的新型疫苗,在预防免疫方面也取得很大进展。在CDV结构蛋白中,核蛋白(N)主要诱导机体产生细胞免疫,融合蛋白(F)主要诱导机体产生中和抗体。本研究成功克隆了犬瘟热病毒小熊猫株(CDVLP)N蛋白和F蛋白基因全长cDNA,并进行了测序和遗传进化分析。以N蛋白和F蛋白基因作为目的基因分别构建了犬瘟热病毒基因疫苗表达载体pCIN和pCIF,并在MDCK细胞中进行了表达。以含CAV-2SY弱毒株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体分别构建了基于pVAX1载体表达元件的CDV N蛋白重组犬2型腺病毒CAV-2-pVAXLPN和F蛋白重组犬2型腺病毒CAV-2-pVAXLPF。为提高重组病毒的外源蛋白表达量,在构建上述两株重组病毒的基础上构建了基于pCI载体表达元件的重组犬2型腺病毒CAV-2-pCILPF,免疫犬实验表明CAV-2-pCILPF诱导犬产生的抗体效价高于CAV-2-pVAXLPF。将基因疫苗与3株重组腺病毒以不同的组合方式进行了免疫犬实验及攻毒保护实验。免疫动物实验结果表明,基因疫苗和重组腺病毒免疫动物后能引起机体产生体液免疫和细胞免疫应答。而且,重组腺病毒可以通过口服和肌肉注射等多种途径免疫动物,尤其是对于凶猛的野生动物狮、虎、豹等采用含有重组腺病毒的食物进行口服免疫更为方便、有效。以上研究将为研制有效预防犬瘟热的基因疫苗和重组腺病毒活载体疫苗奠定一定基础。


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