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抗cyclin D1人源单链抗体的原核表达、纯化及活性研究

邹德生  
【摘要】: 细胞周期调节紊乱是导致肿瘤发生的重要原因,细胞周期蛋白D1(cyclin D1)作为细胞进入增殖周期后的第一个周期蛋白,在多种肿瘤细胞中存在过度表达,与肿瘤的发生,发展和预后都有着极为密切的关系,因此cyclin D1蛋白被认为是肿瘤治疗中一个重要靶点。 单链抗体(single chain variable fragment, scFv)是具有抗原结合活性的最小的抗体片段,具有分子小,易于穿入组织细胞,免疫原性小,能通过基因工程技术大量生产等特点,具有较好的应用前景,尤其是在肿瘤诊断和治疗中具有独特的优势。 本研究采用ELISA、Westernblot、Dot-blot、竞争性抑制、亲和力测定、免疫荧光染色等实验方法,对以重组cyclin D1蛋白为抗原,从人源噬菌体抗体库中筛选出来的抗cyclin D1噬菌体单链抗体进行了可溶性表达、纯化及活性分析。发现筛选到的噬菌体单链抗体能够特异性结合重组cyclin D1蛋白并且具有较强的亲和力,同时,噬菌体单链抗体还能够结合细胞内源性的cyclin D1蛋白。 本实验获得的结果对后续开展抗cyclin D1胞内抗体肿瘤治疗的研究奠定了基础。


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