细胞自身分化抗原-1启动子的克隆及TGFβ1和沉默Smad2/3调节作用的研究

【摘要】：目的:探讨CDA1启动子的功能区域及TGFβ1和Smad2siRNA\Smad3siRNA对其的调节作用。方法:利用PCR和限制性内切酶酶切方法获得不同长度CDA1启动子DNA片段,以基因重组技术构建pGL3-basic-mCDA1promoter质粒,并用RNA干扰技术构建pAVU6+27-siRNA-Smad2/3重组质粒;应用真核细胞转染技术转染小鼠Leuwis肺癌细胞和RAW264.7细胞。结果:(1)成功构建pGL3-Basic-mCDA1promoter质粒及pAVU6+27-siRNA-Smad2/3质粒,并用半定量逆转录PCR及Western-blotting技术证实pAVU6+27-siRNA-Smad2/3在mRNA水平及蛋白水平特异性抑制了Smad2/3的表达。(2)转染小鼠Leuwis肺癌细胞和RAW264.7细胞均证实pGL3-Basic-mCDA1promoter重组质粒具有活性。(3)用TGFβ1刺激已转染pGL3-Basic-mCDA1promoter重组质粒的细胞,观察到TGFβ1对mCDA1启动子具有上调作用。( 4 )转染pGL3-Basic-mCDA1promoter和pAVU6+27-siRNA-Smad2/3重组质粒到Leuwis肺癌细胞,观察到TGFβ1对Smad2siRNA或Smad3siRNA和mCDA1启动子共同转染时mCDA1启动子活性无明显上调作用或上调作用很弱,而在Smad2siRNA和Smad3siRNA与mCDA1启动子共同转染时,TGFβ1对mCDA1启动子呈现为下调作用。结论:不同长度mCDA1启动子的活性不同,对TGFβ1刺激的反应亦存在差异,Smad2siRNA和Smad3siRNA对mCDA1启动子的活性具有下调作用。本研究首次克隆了不同长度mCDA1启动子区域,并用RNAi技术沉默Smad2和Smad3证实CDA1是TGFβ1的靶基因,通过Smad转导通路来调节。

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中国硕士学位论文全文数据库

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1	徐亚维;玉米淀粉分支酶SBEⅡb基因启动子的克隆与功能分析[D];吉林农业大学;2005年
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5	吴滨;人酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶-1基因P1启动子的TNF-α效应元件分析鉴定[D];华东师范大学;2004年
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7	张金平;麻疯树（Jatropha curcas L.）毒蛋白curcin基因及其启动子的初步研究[D];四川大学;2005年
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9	吴祖剑;基于粗糙集理论的基因序列研究[D];中南大学;2008年
10	景福远;利用基因工程技术提高青蒿中青蒿素含量的研究[D];上海交通大学;2008年

中国重要报纸全文数据库

前10条

1	记者　钱铮;人类DNA上启动子数量可能超过十九万[N];人民日报;2006年
2	钱铮;人类DNA上启动子数量可能超过19万个[N];医药经济报;2006年
3	陈勇;专家有突破　借助基因杀死癌细胞[N];人民日报;2005年
4	记者何德功;抗癌病毒可以破坏癌细胞[N];新华每日电讯;2002年
5	记者陈卫东;我破解基因工程产业化难题[N];科技日报;2007年
6	张中桥;第四军医大学西京医院实现肿瘤特异性RNA干扰[N];中国医药报;2006年
7	;基因药物治癌关键障碍被攻克[N];医药经济报;2005年
8	记者　张喜玉;中石化全面启动子公司整合进程[N];上海证券报;2006年
9	;中石化全面启动子公司整合进程[N];财会信报;2006年
10	;金风送爽满篮丰[N];中国医药报;2005年

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