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山楂叶总黄酮对脑缺血—再灌注损伤的保护作用及其机制的研究

纪影实  
【摘要】:山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves ,FMCL)为花期山楂叶中提取的抗自由基组分。已有研究证实山楂叶总黄酮具有扩张冠状动脉、降血压、强心、降血脂等心血管系统的作用,而对于脑血管的作用报道较少。本实验通过建立大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型及H_2O_2诱导PC12细胞缺氧性损伤模型,阐明山楂叶总黄酮对脑缺血-再灌注损伤的保护作用以及探讨其分子机制,为山楂叶总黄酮的临床应用提供科学依据。 首先,在整体水平上,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型,观察山楂叶总黄酮对脑缺血-再灌注大鼠神经功能评分及脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和钙离子(Ca~(2+))含量等生化指标及梗死面积变化的影响;通过HE染色、透射电镜观察山楂叶总黄酮对缺血的神经细胞形态学变化的影响;采用TUNEL方法半定量观察山楂叶总黄酮对神经元细胞凋亡的影响;以及采用免疫组化方法观察山楂叶总黄酮对Fas、CytC蛋白表达的影响。结果显示,山楂叶总黄酮可改善脑功能,增加脑缺血-再灌注大鼠脑组织中SOD活性,保持神经细胞结构的完整性,抑制神经细胞凋亡,缩小脑梗死面积;免疫组化结果显示脑缺血-再灌注后Fas及CytC蛋白的表达均上调,而山楂叶总黄酮可下调CytC蛋白的表达,初步揭示由Fas及CytC介导的凋亡信号转导通路均参与了脑缺血-再灌注后神经细胞损伤的病理过程,而山楂叶总黄酮的保护作用可能与抑制线粒体CytC途径的凋亡有关。 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytoma cells,PC12)具有神经元的特性而作为神经科学离体研究中的重要工具细胞。由于一定剂量的H_2O_2可诱导PC12细胞凋亡,其机制为诱导CytC释放至胞浆,从而激活caspase基因,诱导凋亡级联反应。因此,在细胞水平上的实验采用H_2O_2诱导PC12


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