胰岛素样生长因子1真核细胞表达质粒的构建及其对神经胶质瘤细胞和大鼠脊髓损伤模型神经细胞凋亡影响的实验研究

【摘要】：脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)后,如果能够减少神经细胞的凋亡,降低继发性损伤,对于挽救濒临死亡的神经元、促进神经再生具有重要意义。研究发现,胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor, IGF-1)对于维持神经细胞的生存、生长和损伤后的修复具有极其重要的作用,而关于IGF-1对急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响作用的研究,目前鲜有报道。 为了研究IGF-1对于急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响作用,本研究应用质粒载体介导IGF-1基因转染的方式进行了体外及体内试验。在体外实验中,构建了IGF-1真核细胞表达质粒,应用脂质体介导质粒转基因的方法,转染神经胶质瘤(C6)细胞,ELISA及流式细胞术检测证实转染成功,体外诱导细胞凋亡,流式细胞术检测结果证实,IGF-1可减少体外培养的神经胶质瘤细胞的凋亡。在体内实验中,首先制作了大鼠SCI模型,并分组(IGF-1治疗组、模型组及空白对照组)进行不同干预;IGF-1治疗组,并应用免疫组化法证实转染成功、应用透射电镜、TUNEL等证实IGF-1转染后,SCI大鼠脊髓损伤区神经元细胞凋亡明显减少,BBB评分IGF-1治疗组优于模型组。 本研究结果表明:应用脂质体介导重组IGF-1质粒的方法可以在体外转染C6细胞,并抑制C6细胞的凋亡;IGF-1真核细胞表达载体可以将IGF-1基因转染到大鼠脊髓神经细胞,并稳定表达IGF-1蛋白到转染后三周。证实IGF-1具有抑制神经细胞细胞凋亡、保护残存神经功能的作用。实验结果为进一步揭示脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制及治疗脊髓损伤提供新的治疗方法具有重要意义。