狂犬病病毒街毒株BDRV的分离鉴定及全基因组序列测定

【摘要】： 本研究分别利用免疫荧光法(FAT)、形态学观察、小鼠颅内接种分离和培养病毒法(MIT)和细胞培养分离病毒(CIT)的方法对送检犬脑组织进行了病原的实验室检测与分离,确定为狂犬病病毒,命名为BDRV,并对该街毒株进行了培养特性的鉴定。根据GenBank上收录的不同株狂犬病病毒的全基因组序列,选择保守区域设计并合成13对特异性引物,提取狂犬病病毒街毒株BDRV细胞毒全基因组,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),获得狂犬病病毒全基因组的各段序列,连接PMD18-T,进行测序。 测序结果经NCBI在线BLAST搜索验证后,用分子生物学软件进行序列的拼接和注释,得到了狂犬病病毒街毒株BDRV的全基因组序列。应用生物信息学的理论和方法,利用各种基因信息资源和基因数据库(NCBI、EMBL等),以测定的狂犬病病毒街毒株的全基因组核苷酸序列为基础,运用多种分子生物学软件对所分离的狂犬病病毒街毒株的基因组结构进行全面的分析与比较,并对组成狂犬病病毒基因组的5个基因分别进行了多重序列同源性分析和比对。