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猪链球菌2型单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

高巍  
【摘要】: 猪链球菌2型是一种重要的人畜共患病病原。因而建立高效、灵敏、特异的检测方法对及时控制治疗猪链球菌病具有极其重要的意义。本研究从四川省某发病猪场无菌采集病料,通过对分离菌株形态学观察、培养特性观察、生化试验、PCR检测、动物致病性试验,获得5株猪2型链球菌,并且5株2型菌都有毒力因子MRP和EF,其中S1株、S2株和S5株对BALB/C小鼠有致死性,另2株S3株和S4株对BALB/C小鼠无致病性。利用猪链球菌2型标准株CVCC606全菌作为免疫抗原,经甲醛灭活免疫BALB/C雌性小鼠,取脾进行融合。用提纯的标准菌株CVCC606的荚膜多糖筛选阳性杂交瘤细胞,共筛选出两株抗猪链球菌2型的单克隆抗体G5和C10。单克隆抗体经亚类鉴定,G5和C10均为IgG1型。特异性实验表明G5和C10不与八种猪常见病的细菌性病原体发生交叉反应,但与分离到的5株猪2型链球菌均发生交叉反应。以已制备出的抗猪链球菌2型单克隆抗体G5为基础,建立了双抗夹心间接ELISA法,同时对相关条件进行了优化,并且用此方法对实际样本进行检测,检测出8份血清为阳性,1份血清为阴性。双抗夹心间接ELISA法的建立为猪链球菌2型检测试剂盒的开发奠定了基础。


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