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狂犬病毒G,N基因的表达、单克隆抗体制备与胶体金免疫层析检测试纸的研制

高明华  
【摘要】: 椐CDC统计,2006年,我国人狂犬病发病数自1990年以来首次突破3000例,达3385例,正在形成第三次流行高峰。流行病学调查表明,95%以上的人狂犬病病例是与患病或带毒的犬和猫通过直接或间接接触引起的。因此,为有效遏制人狂犬病,必须对狂犬病流行地区的犬、猫等动物施行强制免疫接种与免疫后抗体效价监测相结合,及对疑似带毒动物进行病原检测。为此,我们利用分子生物学技术和现代免疫学技术进行了狂犬病快速检测方法的研究。 本研究在成功克隆狂犬病毒ERA株(RV ERA strain)糖蛋白(G)基因和核蛋白(N)基因的基础上,进行了序列测定和分析,在分子水平上对狂犬病毒ERA株两个主要结构蛋白的免疫原性和免疫反应性进行了阐述。以原核表达的狂犬病毒核蛋白为抗原建立了用于狂犬病抗体检测的间接ELISA方法,与狂犬病抗体检测试剂盒相比,两种方法的符合率为93.6%。利用杆状病毒表达系统表达了狂犬病毒G蛋白,间接免疫荧光试验(IFA)证明,重组G蛋白具有很好的免疫反应性。用研制的单克隆抗体,制备荧光抗体,建立了直接免疫荧光试验(FAT),实验证明,该方法可用于狂犬病病毒抗原的检测。研制了用于狂犬病血清抗体检测的胶体金免疫层析试纸条(ICS)。通过对免疫犬临床血清样本平行检测实验证明,ICS与荧光抗体病毒中和试验(FAVNT)相比较,二者的相关性为94.0%。


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