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海产品中大田软海绵酸快速检测方法研究

卢士英  
【摘要】: 食物中毒性海洋贝(藻)毒素由海洋中的某些有毒藻类产生后常通过食物链蓄积于海洋贝类、蛤类和螺类等体内,进而引起海产品食物中毒,国内外由于误食有毒海产品而引发中毒的事件时有发生,严重影响了人们的身体健康和对海产品的开发利用。贝毒素的种类很多,对不同毒素世界各国都建立了严格的检验制度,并建立了相应的检测方法和手段。我国对腹泻性贝毒的主要的致病因子—大田软海绵酸(Okadaic Acid,OA)的研究起步较晚,特别是检测方法的研究还尚属空白。为此,本研究将OA与载体蛋白偶联后免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立杂交瘤细胞,并利用小鼠腹水方法大量生产单克隆抗体,对其特性进行充分研究后建立了直接和间接竞争抑制ELISA方法、此法操作简单,灵敏快速,同时利用高效液相色谱串联质谱法建立了海产品中OA的化学仪器检测方法。本文建立的两类检测方法对同一样品的检测具有较好的相关性,能够满足我国进出口海产品中OA限量检测需要。另外,探讨单链抗体在海洋生物毒素检测中的应用,以鼠源单克隆抗体可变区引物扩增并克隆了抗OA单链抗体基因,与抗石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)单链抗体基因(本课题组制备)进行了串联表达,表达的融合蛋白具有良好的反应原性。为利用融合单链抗体建立可同时筛检3种海洋生物毒素的快速检测方法(国家自然基金资助项目,编号:30671762)的研究奠定基础。


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