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角膜溃疡胶原降解机制的研究

李勤  
【摘要】: 目的:探讨角膜溃疡胶原降解过程中多核白细胞与角膜基质细胞的相互作用及地塞米松的影响。方法:本研究建立了角膜基质细胞、多核白细胞体外三维胶原凝胶培养模型,并采用免疫印迹分析、实时定量RT-PCR方法及明胶酶谱分析法测定了角膜基质细胞与多核白细胞的胶原降解量,MMPs的活性和MMPmRNA的表达。观察了IL-1ra以及地塞米松对多核白细胞诱导的角膜基质细胞胶原降解的作用。结果:(1)多核白细胞能够刺激角膜基质细胞介导的胶原降解。这种刺激作用的机理是由于增加了角膜基质细胞MMPs表达而使胶原降解量增加。免疫印迹分析显示:Ne-CM明显增加角膜基质细胞非活化proMMP-1和proMMP-3表达以及活化的MMP-1和MMP-3的表达;实时定量RT-PCR检测结果显示:Ne-CM显著增加角膜基质细胞MMP-1 mRNA和MMP-3 mRNA产生。(2)多核白细胞在三维胶原凝胶中培养的NeC-CM,能使角膜基质细胞的胶原降解量增加10倍;多核白细胞单层培养无胶原刺激的NeM-CM,能使角膜基质细胞的胶原降解量增加2.6倍。(3)MMP的合成抑制剂ilomastat可以明显抑制Ne-CM对胶原降解的刺激作用。(4)IL-1ra可以抑制多核白细胞对胶原降解的刺激作用。(5)地塞米松抑制Ne-CM诱导的角膜基质细胞的胶原降解。地塞米松明显抑制角膜基质细胞非活化proMMP-1和proMMP-3产生;逆转录实时定量PCR检测结果显示:地塞米松对Ne-CM诱导的角膜基质细胞MMP-1mRNA和MMP-3mRNA产生有明显抑制作用;明胶酶谱法分析结果显示:地塞米松可使非活化的pro-MMP-9减少,但对非活化的proMMP-2和活化的MMP-2没有影响。结论:(1)在角膜溃疡发病机制中,角膜基质细胞在角膜溃疡胶原降解过程中起最主要的介导作用。(2)胶原可以活化多核白细胞,被胶原所激活的多核白细胞可能是角膜基质胶原降解破坏的一个重要的决定性因素。多核白细胞在角膜溃疡胶原降解机制中,最主要是作为一个调节因子而不是直接作为效应细胞起作用。(3)多核白细胞对角膜基质细胞胶原降解的影响并不是通过细胞与细胞之间的接触产生的,而是多核白细胞产生的液体因子促进了细胞外基质胶原降解。IL-1参与了多核白细胞与角膜基质的相互作用。(4)地塞米松抑制角膜基质细胞介导的胶原降解,对角膜溃疡可能起到预防和治疗作用,为临床上应用皮质类固醇治疗感染控制后的角膜炎症和一些非感染性角膜溃疡提供了实验依据。


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