蛋白质组学方法筛选卵巢癌顺铂化疗耐药分子靶标及14-3-3ζ蛋白的鉴定

【摘要】： 目的:研究卵巢癌顺铂敏感细胞与耐药细胞间蛋白质表达谱的差异,筛选卵巢癌顺铂化疗耐药相关蛋白,为阐明卵巢癌顺铂化疗耐药机制提供依据。方法:分别提取C0C1和C0C1/DDP的总蛋白,采用DIGE系统分析上述两种细胞样品的蛋白质表达谱,获得蛋白点表达差异信息,运用MALDI-TOF质谱鉴定出差异蛋白质并对差异蛋白中的14-3-3ζ应用Western blot再次鉴定。结果:有29个蛋白质点发生变化,通过质谱鉴定和数据库检索,鉴定出14个蛋白质点相对于13种蛋白质,其中在C0C1/DDP中表达上调的蛋白有copine 1,14-3-3 theta和14-3-3 zeta;表达下调的蛋白有KHSRP, hNASP,TATA结合蛋白相互作用蛋白等10种蛋白。选取表达上调蛋白中的14-3-3ζ蛋白,用Western blot进一步鉴定。结论:本实验首次应用先进的DIGE技术筛选卵巢癌顺铂化疗耐药相关蛋白,其中14-3-3σ,14-3-3ζ和hNASP等均在卵巢癌顺铂耐药研究中未曾报道。用Western blot对14-3-3ζ鉴定获得了满意的14-3-3ζ蛋白免疫印迹图谱,推测此蛋白有望成为克服卵巢癌顺铂耐药的新靶点。