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骨桥蛋白及其反义基因在病毒性心肌炎中表达及作用的研究

印芳颖  
【摘要】: 病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是小儿心血管系统常见病、多发病,近年来发病率有增高的趋势。因其发病机制尚未完全阐明,至今国内外对其尚无特效的治疗手段。少数病毒性心肌炎可演变为扩张型心肌病,严重威胁小儿生命而受到医学界重视。骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)是一种含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)的分泌型糖基化磷蛋白,已归类于细胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白。Gachelli和Shanahan等在1991年和1993年分别用差异显示技术发现OPN是血管平滑肌细胞(VSMC)由收缩表型向合成表型转化的标志基因,此后国内外的学者开始对OPN与心血管疾病的关系进行研究,尤其在动脉粥样硬化方面,但目前国内外对其与小儿病毒性心肌炎的关系尚无研究。本研究通过构建柯萨奇B3型病毒(CVB3)BALB/C小鼠病毒性心肌炎(VMC)模型,运用半定量RT-PCR方法、免疫组织化学方法确定了OPN在VMC发病过程中的作用,证实了OPN与VMC发病过程中的心肌组织浸润的单个核细胞数量、心肌病变积分、血清CK-MB水平等指标呈正相关。构建鼠骨桥蛋白反义基因真核表达质粒pcDNA3.1-ANOPN,通过裸DNA直接注射法成功将构建的骨桥蛋白反义基因表达载体导入VMC模型小鼠心肌中并有效的降低了VMC模型小鼠心肌中OPN的表达,减轻了VMC病情,表明所构建的OPN反义基因对小鼠病毒性心肌炎具有一定的治疗效果。结果说明OPN在小鼠病毒性心肌炎的发病过程中具有重要作用,通过降低小鼠CVB3感染后心肌组织OPN的表达可减轻VMC病情,为病毒性心肌炎的临床治疗应用提供了理论和实验依据。


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