IL-2Rα模拟肽的筛选及其抑制小鼠皮肤移植排斥反应的研究

【摘要】： 免疫抑制剂在器官移植排斥反应的预防和治疗中起到了关键作用,人们认为最佳的免疫抑制剂至少应达到三个目标:选择性、协同性和特异性。但是,当前临床应用的免疫抑制剂只是部分地满足这些目标。为研制新型的肽类免疫抑制剂,我们以抗人IL-2Rα单克隆抗体5G1为靶分子,对噬菌体环七肽库进行了5轮筛选,经鉴定获得了5个与靶分子具有高亲和力的噬菌体阳性克隆,通过对其DNA序列进行分析,得到IL-2Rα模拟表位肽的氨基酸保守序列: Lys-X-{X}-Lys-Gly。应用化学合成法制备环七肽CP,其氨基酸序列为:Cys-Asn-Ala-Leu- Lys-Arg-Lys-Gly-Cys,相对分子量为990.2。经检测证实CP对正常小鼠脾细胞没有毒性。计算机模拟证实CP与人IL-2的功能活性部位可形成稳定、良好的结合。经淋巴细胞周期测定、淋巴细胞增殖反应、迟发型超敏反应和局部移植物抗宿主反应等多项体内外的实验证实:环七肽CP具有较强的免疫抑制活性,其与环孢菌素A联用抑制效应明显增强,显示二者具有协同效应。环七肽CP可有效地抑制小鼠异基因皮肤移植排斥反应,诱导出宿主对皮肤移植物的耐受;实验证实克隆不应答、减少宿主体内CD4+ T淋巴细胞的数目和抑制其功能、Th1型细胞因子偏移的纠正等机制参与了移植耐受的形成。以上的实验结果表明:环七肽CP以IL-2Rα模拟肽的方式发挥生物学效应,本研究为将其研制成一种高效、低毒、特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定了基础。