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岩栖蝮蛇去整合蛋白的分离、纯化与抗肿瘤作用研究

张及禄  
【摘要】： 去整合蛋白(disintegrin)是一类从蛇毒和水蛭中分离得到的含RGD(Arg-Gly-Asp)或KGD(Lys-Gly-Asp)结构域的小分子多肽。本实验首先通过有机溶剂沉淀法从长白山岩栖蝮蛇蛇毒中制得粗蛋白,然后使用凝胶过滤色谱法(固定相选用Sephadex G-50和Sephadex G-25)对粗蛋白进行进一步的分离纯化。纯化后的蛋白组分使用尿素改良的SDS-PAGE(Tris-Tricine系统)碱性不连续垂直电泳鉴定。电泳图谱显示为单一条带,统计学方法计算其分子量约为5.2kDa。其属于金属蛋白酶/去整合蛋白Ussurin(长白山岩栖蝮蛇蛇毒中的一种P-Ⅱ类金属蛋白酶)水解后释放出来的一种去整合蛋白成分(命名为Saxis)。为了研究其抗肿瘤作用,本实验使用了MTT比色法检测Saxis对体外培养的宫颈癌细胞HeLa,肝癌细胞SMMC-7721和胃腺癌细胞SGC-7901的生长抑制作用,并在镜下观察给药后细胞形态的改变。实验结果表明Saxis能够抑制HeLa细胞、SMMC-7721细胞和SGC-7901细胞的增殖,并且还具有直接杀伤肿瘤细胞的作用。因此去整合蛋白Saxis很有前途开发成为一种抗癌新药。


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