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SARS冠状病毒S糖蛋白基因的克隆表达

王晓佳  
【摘要】: SARS冠状病毒是导致2002~2003年SARS爆发流行的病原体,其扩散范围之广、传播速度之快和对国民经济影响之严重为近年来新发现传染病之最。在新出现的病毒病(HIV、Ebola、Nipah、Hendra)中,SARS传播速度因发达便利的交通而加速,成为21世纪第1个可造成全球性灾难的新现代传染性疾病。 SARS冠状病毒的S蛋白是非常重要的膜Ⅰ型糖蛋白,它主要负责侵染细胞,介导与受体细胞的融合,并且诱导中和抗体的产生。除此之外,它在细胞毒力和病理发生上都起着举足轻重的作用。SARS冠状病毒的S蛋白含有大量的抗原表位,因此针对S蛋白的血清抗体的检测也同时是诊断SARS类疾病的硬性指标。S蛋白全长1255aa,想要在体外全部表达是十分困难的,即使表达,可溶性也极差。有研究表明,S蛋白在侵染受体细胞、介导细胞融合过程中,是以三聚体形式存在,主要是S蛋白N末端片段与蛋白膜外结构域结合,因此,我们主要选择了S蛋白N末端的576bp基因片段,进行大肠杆菌原核克隆表达,拟以表达并分离纯化后的S蛋白N末端片段为靶标,进行噬菌体肽库筛选,寻找N末端序列的亲和性小肽,以此来阻断S蛋白三聚体结构的形成。此部分工作还在进行中。另外,我们还选择了包含有受体结合区域的S蛋白的N端1184bp的片段,进行了此部分基因的真核哺乳动物细胞的表达,希望表达出具有似天然活性的糖基化蛋白,进一步研究相关性质。 时至2008年的今日,虽然SARS冠状病毒已经默默的远离了我们的视线,但我们也只是初步了解了这个疾病的病原学和流行病学,对于它的来源、入侵、复制、传播以及引起机体损伤中的许多问题还未完全明了,因此我们的基础研究工作还是相当必要的。为了防患于未然,我们无法掉以轻心。


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