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TGF-β1诱导肾小管上皮细胞发生转分化状态研究

陈爽  
【摘要】: 肾纤维化是慢性肾病发展到终末期的共同表现,包括慢性移植肾功能丧失。纤维化关键细胞肌成纤维细胞的来源一直备受瞩目。近十年来,肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化可能是肌成纤维细胞的来源之一备受重视。引起肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的因素很多,转化生长因子-β1(TGF-β1)作为促纤维化因子在肾小管上皮转分化中的作用也越来越受到关注。本研究以人肾小管上皮细胞系HK-2为对象,选择广谱细胞角蛋白,E-钙粘附蛋白和细胞角蛋白-19(keratin-19)为上皮细胞标记物,S100A4蛋白,α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(vimentin)为间叶组织标记物,经免疫细胞化学和RT-PCR方法检测TGF-β1对培养HK-2细胞的转分化作用。结果显示:浓度分别为1ng/ml,5ng/ml和10ng/ml TGF-β1诱导组诱导HK-2细胞24小时,48小时,72小时,各诱导组细胞的广谱细胞角蛋免疫细胞化学染色均为阳性,与无TGF-β1刺激的对照组比无差异;而E-钙粘附蛋则表现为与对照组相比,各诱导组细胞在诱导48小时,其阳性染色明显减弱,诱导至72小时几乎消失。此时,间叶细胞标记物S100A4和α-SMA表现为,各组诱导24小时,S100A4表达明显强于对照组,继续诱导后仍强于对照组;而α-SMA则在各浓度TGF-β1诱导48小时出现阳性染色,以5ng/ml TGF-β1组最为明显,72小时各诱导组α-SMA表达均强于对照组。RT-PCR结果显示:TGF-β1刺激48小时后vimentin和α-SMA的mRNA表达均有所增加,以浓度5ng/ml TGF-β1引起的vimentin和α-SMA的mRNA表达增加为显著;keratin-19的mRNA的表达未见降低。因此得出结论:TGF-β1可以体外诱导HK-2细胞出现上皮细胞-间充质转分化;以5ng/ml的TGF-β1浓度作用最明显;转分化时广谱细胞角蛋白未见消失。


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