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人精子鱼精蛋白2差异表达及基因多态性与男性不育

李伟  
【摘要】: 鱼精蛋白又称精核蛋白,是在晚期精子细胞中出现的一种富含精氨酸和半胱氨酸的碱性蛋白质。由于鱼精蛋白异常或缺失,在精子发生过程中组蛋白未被鱼精蛋白取代(即精子细胞内未发生组蛋白-鱼精蛋白取代反应,Histone-to-Protamine Replacement Reaction,HPRR),出现核蛋白转型障碍,导致原发性男性不育,从而提出鱼精蛋白与男性不育有关。 本研究旨在蛋白质水平上探讨鱼精蛋白2(P2)差异表达以及在基因水平上研究PRM1基因G197T和PRM2基因C248T多态性与男性不育之间的相关性。本研究首先在临床收集筛选精液样本,采用TRIzol试剂来提取精子中总蛋白和基因组DNA,通过Western Blotting技术检测不同实验对象中精子P2的差异表达。首先定量精子蛋白,再通过SDS-PAGE分离和免疫印迹检测。结果显示:少精子症和弱精子症中P2表达量下降。从精子核中提取基因组DNA,通过GenBank数据库检索获得PRM1和PRM2基因全序列,特异性引物运用Primer5.0软件自行设计完成,PCR产物中包含PRM1基因SNP(single nucleotide polymorphism) 197位点和PRM2基因SNP248位点。利用REBase数据库查询到若G197T位点碱基突变后BseRⅠ的酶切位点消失,C248T位点碱基突变后EaeⅠ的酶切位点消失,利用序列变化我们采用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性分析(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)方法筛查PRM1基因G197T和PRM2基因C248T多态性。


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