人骨肉瘤多药耐药细胞模型的建立及蛋白质组学分析

【摘要】： 骨肉瘤是最常见的恶性骨肿瘤,儿童和青少年多发,预后极差。目前的治疗主要是以手术、化疗为主的综合治疗。临床上发现骨肉瘤细胞对化疗药物的耐受,特别是交叉耐受是导致化疗失败的主要原因,因此,近年来骨肉瘤多药耐药机制的研究已逐渐成为人们研究的热点。然而针对骨肉瘤多药耐药机制的研究尽管在基因水平上已取得了不少进展,但还不能完全解释多药耐药现象。蛋白质组学是后基因组时代新兴的学科,应用差异蛋白质组学的方法对骨肉瘤多药耐药细胞蛋白质组进行研究有可能为骨肉瘤多药耐药机制提供新的线索。 1、人骨肉瘤多药耐药细胞模型的建立及生物学特性分析:以人骨肉瘤细胞MG-63为亲本细胞,小剂量阿霉素经过6个月诱导,成功建立了人骨肉瘤细胞的多药耐药模型,并进行了相关生物学特性分析:(1)多药耐药MG-63/DXR100与其亲本细胞相比,细胞表面突起较多,细胞内大量糖原样空泡及脂滴,粗面内质网更为丰富。(2)MG-63/DXR100仍有较强的增殖能力,但较亲本细胞增殖能力差,流式细胞周期分析显示细胞阻滞于S期。(3)MG-63/DXR100除了对阿霉素有较高的耐药性外,对甲氨蝶呤、环磷酰胺和长春新碱也有不同程度的交叉耐药性。(4)在mRNA和蛋白质水平上,P-gp、MRP3在MG-63细胞均不表达,而在MG-63/DXR100细胞中均有较强表达。 2、人骨肉瘤多药耐药细胞蛋白质组学分析:应用差异蛋白质组学的方法比较MG-63/DXR100与其亲本细胞的蛋白质组成差别。经双向电泳及质谱分析,共有5个蛋白点被成功鉴定,它们分别是:具有细胞内解毒功能的乙醇脱氢酶6(ADH6);与肿瘤细胞转移关系密切的基质金属蛋白酶1(MMP1);可能具有抑癌基因功能的FRMD3;分别由128个和300个氨基酸残基组成的两个未知蛋白。其中ADH6、MMP1和两种未知蛋白在实验组MG-63/DXR100中表达增高,而FRMD3在MG-63/DXR100中表达降低。这些差异表达的蛋白可能参与了骨肉瘤多药耐药发生机制,为更深入的研究提供了新的线索。