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基因表达谱监测对抗真菌化合物潜在作用靶标的研究

刁有江  
【摘要】: 为探讨抗真菌化合物对皮肤癣菌的抗真菌作用机制和潜在的作用靶标,为新型抗真菌药物的开发提供基础。我们建立了高通量分析和筛选抗皮肤癣菌先导化合物潜在作用靶标的技术平台。对用于筛选先导化合物的红色毛癣菌对抗真菌化合物敏感性实验方案进行了探索,构建了14个红色毛癣菌cDNA文库,进行了大规模测序,获得了10,224条红色毛癣菌unisequence,并制备了具有10,000个点的cDNA芯片。通过监测基因表达谱,我们研究了先导化合物盐酸药根碱、阳性药物伊曲康唑、克霉唑作用前后红色毛癣菌的基因表达谱变化。盐酸药根碱处理前后红色毛癣菌基因表达谱的变化提示我们细胞膜和细胞壁受到了盐酸药根碱作用的影响。伊曲康唑和克霉唑处理前后红色毛癣菌基因表达谱的变化提示我们细胞膜受到了药物作用的影响。为了验证芯片数据的可靠性,通过实时定量PCR对芯片数据结果进行了验证。通过分析,我们认为,盐酸药根碱的作用机制可能与抑制麦角固醇和几丁质生物合成有关;并且推测ERG6编码的固醇C-24甲基转移酶、几丁质合成酶CHS3、几丁质合成酶V可能是盐酸药根碱的潜在的抗真菌作用靶标。通过对伊曲康唑、克霉唑处理前后基因表达谱变化的分析,我们确认了伊曲康唑和克霉唑作用于麦角固醇生物合成的分子作用机制及其药物作用靶基因。


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