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戊型肝炎病毒流行病学及其感染机理探索研究

屈勇刚  
【摘要】: 本研究应用ELISA法对吉林、内蒙古、黑龙江、新疆、四川、广州地区部分动物群和人群进行血清流行病学调查,结果发现:猪、马、牛、羊、鹿、狗、鸡、野生猕猴以及人的HEV-IgG抗体阳性率分别为79.67%、15.73%、33.07%、22.02%、44.11%、58.33%、5.11%、8.80%、29.98%。其中猪的抗体阳性率最高,鸡的抗体阳性率最低。吉林省人群急性感染主要发生于男性,20-69岁年龄段比较易感,临床病例主要发生于7至11月份。 在分子流行病学研究中,我们共获得49株HEV部分核酸序列。通过序列比较和遗传进化分析,表明人源HEV与动物源HEV有极高的同源性,证实所获HEV株均属于基因IV型。进一步分析表明,该49株HEV可分为3个亚型,其中1个亚型不同于目前所有已知的基因亚型。 为探索致病机理,本研究表达了重组猪源HEV衣壳蛋白p293(ORF2 aa382-674)和ORF3编码蛋白pORF3,并初步研究了两种蛋白与HepG2细胞的相互作用。研究发现p293(ORF2 aa382-674)可形成直径为30~40 nm左右的病毒样颗粒(VLP)。免疫荧光分析发现p293(ORF2 aa382-674)可以结合到HepG2细胞表面。将p293(ORF2 aa382-674)和HepG2细胞膜蛋白作用后,经过SDS-PAGE结合质谱分析,发现p293(ORF2 aa382-674)可以与CD98, CD71, CD166三种膜表面蛋白结合。 为建立HEV的分离培养方法和动物感染模型,本研究尝试用HEV RNA阳性材料感染猪、长爪沙鼠和鸡胚。结果发现:9~11日龄鸡胚接种后,盲传至第3代时,仍能从尿囊液中检测到HEV RNA。长爪沙鼠和猪接种后,可以从肾、脾、肠系膜淋巴结、肝、肺、血液、粪便中检测到HEV RNA,但没有明显的临床症状。


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