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RNA干扰survivin基因表达增强HeLa细胞电离辐射敏感性的实验研究

龚平生  
【摘要】: survivin是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAP)家族的新成员,特异性表达于人的胚胎组织以及多数人类肿瘤细胞。在几乎所有常见肿瘤中,survivin都有表达。Survivin具有抑制凋亡、参与细胞周期调控、促进血管生成等生物学作用,与肿瘤细胞对辐射及化疗药物的耐受性增强有关,是肿瘤靶向治疗的重要基因之一。 本研究旨在探讨survivin蛋白在X射线诱导HeLa细胞凋亡及染色体不稳定性(CIN)过程中所发挥的生物学作用。采用流式细胞术(FCM)检测X射线照射HeLa细胞后survivin蛋白表达、细胞凋亡和CIN的变化规律。 结果显示,survivin在HeLa细胞中表达异常高,并且具有较高的转录水平;单纯X射线照射不能诱导HeLa细胞发生凋亡;受照细胞中发生CIN的细胞数随受照剂量的增高而显著增加,并且在接受4.0Gy照射后随着培养时间延长,发生CIN的细胞也随之增加。由于survivin具有组织表达选择性,使它成为RNAi技术应用的理想靶向基因。 根据RNAi原理,利用pENTR-basic载体能够转录产生小的发卡状siRNA的特点,本研究成功构建了以survivin基因为靶点的pENTR-anti-SVV载体,在mRNA水平干扰survivin蛋白表达,以期对survivin蛋白在X射线诱导HeLa细胞凋亡及X射线诱导CIN过程中所产生的生物学影响进行研究。 结果表明,干扰survivin蛋白表达后,电离辐射可以显著诱导细胞凋亡的产生,同时,发生CIN的细胞数也比单纯照射组显著增多。以上结果说明干扰survivin蛋白表达与辐射相结合可以加强辐射诱导的细胞凋亡及CIN的发生,本研究将为增强肿瘤辐射敏感性、提高放射治疗疗效提供理论依据。


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