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GICA一步法检测HIV和TP诊断试剂的研究

杨怀宁  
【摘要】: 本研究采用胶体金免疫层析技术(GICA)研制一滴血一次实验检测两种疾病,制备艾滋病毒(HIV)抗体和梅毒(TP)抗体一步双联免疫胶体金快速诊断试剂盒,经过实验条件优选,使此检测方法灵敏、精准、特异,操作简便、快速,提高技术含量,降低检测成本,便于流动监测,使其适用于现场实地监测,达到及时准确地对HIV和TP进行筛查、监测的目的。 本研究对HIV和TP的抗原片断进行了优化选择,通过计算机分析同源序列确定了新的抗原位点。成功构建了由HIV-1/2和TP外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env和pRSETB-tp,在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120、HIV-2gp125/gp36及TpN15、TpN17、TpN44.5、TpN47多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性,采用胶体金免疫层析技术(GICA)双联HIV和TP抗原,一步同时检测HIV和TP抗体。 结果显示目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见与设计相对分子质量相符的蛋白带。免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好的结合,与其他患者血清无交叉反应;pRSETB-tp质粒的TP表达蛋白与TP患者血清都能较好的结合,与其他患者血清无交叉反应。 成功构建了一步法检测HIV和TP的胶体金诊断试剂,胶体金试纸能高效的检测HIV和TP患者血清,具有较高的特异性和敏感性。为一步、同时、快速检测HIV和TP抗体试剂盒的研制和开发提供了重要的研究成果,具有广阔的应用前景。


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