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口腔鳞状细胞癌中Apaf-1基因、DAPK基因表达及启动子区甲基化研究

李春艳  
【摘要】: 口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma, OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤,其发病机理目前尚不明确。本研究在吉林省科技厅基金资助下(项目编号200705349)对凋亡蛋白酶活化因子1(Apaf-1)和死亡相关蛋白激酶(DAPK)在OSCC发生发展过程中的作用机制及去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-deoxycytidine, 5-Aza-CdR)对舌鳞癌Tca8113细胞生物学行为的影响进行探讨。目前国内外罕有见到对Apaf-1基因、DAPK基因在OSCC组织及细胞系中表达及甲基化情况系统研究的报道。 本研究应用免疫组织化学方法和半定量RT-PCR方法检测Apaf-1和DAPK蛋白及mRNA表达,结果显示正常口腔黏膜组织Apaf-1、DAPK蛋白及mRNA表达无减少或缺失。OSCC组织中Apaf-1、DAPK蛋白表达及mRNA表达均显著低于正常口腔黏膜。应用甲基化特异性PCR检测基因启动子区甲基化情况,结果显示正常口腔黏膜组织中Apaf-1基因和DAPK基因启动子区无甲基化。OSCC组织中Apaf-1基因、DAPK基因启动子区甲基化率均显著高于正常口腔黏膜,基因启动子区甲基化与其在肿瘤组织中的蛋白表达及mRNA表达下调呈正相关。Apaf-1基因和DAPK基因的蛋白表达、mRNA表达及基因启动子区甲基化均与肿瘤组织的病理分级、患者的年龄及性别无关。应用去甲基化药物5-Aza-CdR处理舌鳞癌Tca8113细胞,研究Apaf-1基因、DAPK基因去甲基化的转录调节作用,结果显示经5-Aza-CdR处理,舌鳞癌Tca8113细胞的存活率明显降低,凋亡率明显增高,Apaf-1基因、DAPK基因发生去甲基化及mRNA表达上调,且呈药物剂量依赖性。 通过本研究,得出以下结论: 1. OSCC的发生发展与Apaf-1和DAPK的mRNA及蛋白表达明显降低密切相关。 2.口腔鳞状细胞癌组织中,Apaf-1基因和DAPK基因启动子区发生甲基化,是导致Apaf-1和DAPK蛋白表达、mRNA表达下调的重要原因之一。 3. Apaf-1基因、DAPK基因去甲基化后,Apaf-1基因、DAPK基因表达上调,促进肿瘤细胞凋亡,因此Apaf-1基因、DAPK基因可作为口腔鳞状细胞癌治疗的潜在靶点。 4. Apaf-1和DAPK基因的表达及甲基化均与OSCC的病理分级、患者的年龄及性别无关。


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