日本血吸虫复合表位基因疫苗免疫研究

【摘要】： 为了研制一种新型的血吸虫疫苗,本研究通过同源重组的方法成功的构建了表达日本血吸虫复合表位基因的重组伪狂犬病病毒和复合表位核酸疫苗,并对获得的重组病毒和表位核酸苗进行了小鼠和绵羊的免疫试验。 本研究选取包括磷酸丙糖异构酶(TPI),脂肪酸结合蛋白(FABP),副肌球蛋白(Paramyosin),钙结合中性蛋白酶(Calpain)的几个抗原基因的主要抗原表位,人工合成一段多表位基因序列,命名为TPC,将此基因序列插入日本血吸虫26kDa GST基因,构建一个融合表达基因GST-TPC,将此复合表位基因克隆入pVAX1真核表达载体,构建复合表位核酸苗pVAX/GST-TPC,酶切获取复合表位基因表达盒,与PRV疫苗株Bartha-K61的中间转移载体(本室构建)连接,再与PRV/LacZ基因组共转染Vero细胞,蓝白斑筛选获得重组病毒PRV/GST-TPC,对重组病毒的PCR,RT-PCR,IFA鉴定表明融合基因GST-TPC整合入病毒基因组,并且能正常转录。同时为探讨白细胞介素18的免疫佐剂活性,本研究克隆了小鼠的IL-18基因,亚克隆入pVAX1真核表达载体,构建了真核表达质粒pVAX/IL-18,与多表位核酸苗和重组病毒联合进行了小鼠的攻虫实验。体液和细胞免疫检测结果表明,IL-18能有效增强复合表位核酸苗的抗血吸虫免疫应答,促进免疫反应向Th1型发展,有可能作为疫苗的候选佐剂之一。小鼠和绵羊的攻虫保护实验表明复合表位核酸苗和重组病毒均能对血吸虫的尾蚴攻击产生免疫保护作用。在小鼠中复合表位基因核酸苗和重组病毒产生32.1%和35%的成虫减虫率,肝脏减卵率分别为33.3%和36.2%。绵羊的减虫率分别为41.8%和48.6%,肝脏减卵率为26.3%和49.0%,为血吸虫疫苗的下一步研究打下了良好基础。