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局部应用血管内皮生长因子及间充质干细胞培养物提高皮瓣成活率的实验性研究

刘书会  
【摘要】: 针对各种原因造成的组织缺损进行的皮瓣移植术中,如何提高皮瓣的成活率一直是损伤与重建外科的研究热点问题。血管内皮生长因子(VEGF)是目前所知道的唯一作用于血管内皮细胞表面,直接刺激血管形成的细胞因子。它可通过细胞间隙的形成增加内皮通透性,还可以通过自分泌和旁分泌作用,刺激血管内皮细胞有丝分裂和增加血管内皮细胞渗透性促进血管生成,进而起到促进组织愈合的作用。骨髓间充质干细胞(MSCs)是存在于骨髓中的具有多种分化潜能的祖细胞,能增殖迅速,并且有低免疫原性的特点。它能够在特定的条件下向所有起源于中胚层的细胞分化。 本实验采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),经免疫组化、流式细胞分析方法及根据MSCs具有多向分化潜能的特点采用的反证法证明所分离的细胞是hMSCs,而不是成熟细胞。传代培养至三代以上的细胞用于动物实验。本研究根据VEGF和MSCs的生物学特性,将实验动物随机分成四组,即空白对照组、VEGF组、hMSCs组,VEGF+hMSCs组。通过对不同分组实验动物的术后临床观察、皮瓣成活率检测、组织病理检测、免疫组化检测及微血管密度计数等实验结果进行统计学分析,得出采用密度梯度离心法和贴壁筛选法可以得到纯度较高、生物学性能稳定的骨髓间充质干细胞;hMSCs具有低免疫原性或无免疫反应性的特性;单独将VEGF或hMSCs应用于超比例皮瓣均可提皮瓣的成活率以及VEGF和hMSCs的联合应用对提高超比例皮瓣成活率的效果明显优于单独应用VEGF或hMSCs的效果。针对提高皮瓣成活率的研究很多,但将VEGF和hMSCs联合应用考察其有效性的研究尚少。本实验在证明了骨髓间充质干细胞具有低免疫原性或无免疫反应性的特性的同时也得出了VEGF和hMSCs的联合应用在短期内可重建缺血区域的血液循环,解决超比例皮瓣的远蒂端缺血问题,提高皮瓣成活率和创面组织的修复质量的结论。


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