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脐血间充质干细胞体外培养及其对同种异体淋巴细胞增殖的影响

丛舒  
【摘要】: 目的:建立更适合于人脐血MSC的分离和培养的方法,观察HUCB-derived MSCs生长特性、细胞化学特征,了解HUCB-derived MSCs的免疫调控作用。 方法:用红细胞裂解法加贴壁法分离纯化HUCB-derived MSCs;不同培养条件筛选更适合于人脐血MSC的培养方法;用光学显微镜观察其形态特征:用胎盘蓝染色法了解其生长曲线并计算出其倍增时间;通过细胞化学染色进一步了解其细胞化学特征;采用MTT比色法检测HUCB-derived MSCs对同种异体脐血淋巴细胞增殖的影响。 结果:用红细胞裂解法加贴壁法分离和初步纯化了HUCB-derived MSCs。 用胎牛血清包被培养瓶(板)可以明显提高HUCB-derived MSCs的贴壁率,培养基中含5% FBS比含2% FBS和10% FBS更有利于HUCB-derived MSCs的产生。当胎牛血清浓度为2%时,未包被组/包被组= 0% / 5.6% ,胎牛血清浓度为5%时,未包被组/包被组=16.7% / 27.8% ,胎牛血清浓度为10%时,未包被组/包被组=16.7% / 22.2%。HUCB-derived MSCs的形态为成纤维细胞样,呈梭形或纺锤形。体外培养1-8天内,细胞数量随着时间的延长而逐渐增加。细胞倍增时间为56.6h。细胞化学染色显示PAS(+),NBE (+)。HUCB-derived MSCs对同种异体脐血淋巴细胞增殖能力具有抑制作用,其抑制程度与接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例有关。与无HUCB-derived MSCs的对照组相比较,当接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例为100:1时,抑制率为21.3% ,而当接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例为50:1时,其抑制率达53.3%。 结论:1.用裂解法加贴壁法能够成功分离和初步纯化HUCB-derived MSCs,且较通常采用的离心法加贴壁法更省时省力,费用大大减低,污染机会很少。2.用胎牛血清包被培养瓶(板)可以明显提高HUCB-derived MSCs的贴壁率,培养基中含5% FBS比含2% FBS和10% FBS更有利于HUCB-derived MSCs的产生。3.通过细胞形态学和细胞生长曲线、细胞倍增时间以及细胞化学染色特征的观察,可以认定为HUCB-derived MSCs。4. HUCB-derived MSCs具有免疫负调控作用,能抑制同种异体淋巴细胞的增殖,同时,此种抑制作用与接种的脐血淋巴细胞数与HUCB-derived MSCs数的比例有关。


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