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上皮性卵巢癌参与免疫逃逸相关基因Igs,FOXP3的表达研究

张多加  
【摘要】: 上皮性卵巢癌患者体内多存在机体免疫功能的异常,主要表现为肿瘤局部的细胞免疫普遍受抑制,其效应细胞,如CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞功能减低,而在体液免疫方面却呈现出难以理解的患者外周血Ig水平升高。为揭示上皮性卵巢癌免疫反应低下的诱导和维持的相关机制,本论文进行了以下两部分的实验研究: 第一部分:应用免疫组织化学染色法研究IgG、IgA、IgM、IgD、IgE在上皮性卵巢癌组织芯片(含上皮性卵巢癌177例)和50例卵巢上皮性良性肿瘤上皮组织中的表达特点,分析IgG、IgA、IgM、IgD、IgE的表达强度与上皮性卵巢癌病理分级的相关性。结果发现Ig在卵巢上皮性癌组织中高表达,并存在大量Ig细胞外分泌的形式;IgG、IgA、IgM、IgD、IgE在上皮性卵巢癌组织的表达水平明显高于卵巢良性肿瘤上皮组织(P0.001);IgG、IgA、IgM、IgD、IgE的表达强度与肿瘤病理分级成正相关(P0.001),肿瘤的分化程度越低, Ig的表达强度越强。本研究的创新点在于在国内外首次进行Igs在组织学领域中大样本的观察研究。 第二部分:1.应用免疫组织化学染色法应检测FOXP3在46例上皮性卵巢癌组织中的表达。2.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SKOV3和CAOV3细胞中FOXP3 mRNA的表达,测序,进行序列及开放阅读框(ORF)的比对;应用免疫细胞化学染色法检测FOXP3蛋白在SKOV3和CAOV3细胞中的表达。3.进行FOXP3特异的siRNA干涉实验,观察siRNA干涉后SKOV3细胞FOXP3 mRNA的表达变化,通过流式细胞术检测siRNA干涉后48、72、96、120小时FOXP3蛋白的表达,并与Non-silencing siRNA组进行比较。结果:1.在36/46(78.3%)例卵巢上皮性癌组织中检测到癌细胞表达FOXP3蛋白;2.在SKOV3和CAOV3细胞中均检测到FOXP3 mRNA的表达;SKOV3细胞的FOXP3 mRNA片段与GeneBank中的人FOXP3 mRNA中的序列一致,而CAOV3细胞的FOXP3 mRNA片段有1个突变位点,造成1个亮氨酸转变为1个苯丙氨酸;FOXP3蛋白在SKOV3细胞中定位于细胞核,而在CAOV3细胞中定位于细胞浆。3.发现siRNA干涉后48h可有效抑制FOXP3 mRNA的表达,并且干涉后48、72、96、120小时siRNA组FOXP3蛋白表达低于Non-silencing siRNA组比较。本研究的创新点在于在国内外首次证明上皮性卵巢癌和上皮性卵巢癌细胞系可表达转录因子FOXP3,为上皮性卵巢癌细胞逃逸局部免疫效应细胞的攻击而不断增殖、浸润和转移的机制提供了重要的理论依据。


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