奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌基因工程疫苗构建及实验免疫

【摘要】： 本研究利用分子生物学、细菌学、免疫学及基因工程和DNA重组技术等理论和方法,以研制安全有效的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌基因工程疫苗为目的,基于金黄色葡萄球菌的基因组结构、感染与致病以及免疫反应等特点,甄选具有主要抗原活性的纤黏连结合蛋白A(FnbA)配基结合区基因和凝集因子A(ClfA)及其活性基因作为研究对象,通过PCR获得目的基因,利用原核表达系统制备了可溶性的重组蛋白,纯化后进行了小鼠免疫试验;以安全性真核表达载体pVAX1为基础,扩增牛白介素18基因(bIL18)作为基因佐剂,构建了系列单独表达或共表达pFnbA、ClfA和bIL18基因的侯选重组核酸疫苗质粒,开展了小鼠免疫试验研究。同时,通过不同疫苗组合、添加佐剂以及免疫-增强(Prime-boost)等策略探讨了联合免疫在临床应用的可行性。 运用血清ELISA抗体检测、Th1/Th2类细胞因子含量测定、T细胞增殖实验等方法对免疫小鼠的各项指标进行综合评价,结果表明,所构建候选疫苗均能诱导机体产生特异的细胞免疫和体液免疫应答,其中3种蛋白类疫苗主要以体液免疫为主;5种DNA疫苗二者兼有;添加壳聚糖佐剂组具有更强的免疫诱导作用;以DNA疫苗首免、重组蛋白加强免疫刺激机体产生的免疫应答水平优于单独应用同种疫苗进行的免疫。 上述研究为奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌新型基因工程疫苗的研制提供了原始数据,建立了技术平台,为有效免疫和临床应用研究奠定了坚实基础。