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磁性复合粒子的表面修饰及其在蛋白纯化中的应用

戴洁  
【摘要】: 本论文旨在将固定金属亲和色谱法和磁分离技术相结合,制备具有固定金属亲和性的磁性分离材料,并通过调整螯合配体的状态,制备具有不同表面性质的磁性复合粒子。根据不同的表面性质,将粒子分别应用于带正电荷蛋白,His-tag蛋白,磷酸化蛋白的分离纯化。 本论文由四个部分组成: 1.以St?ber方法合成的60 nm SiO2粒子为基础,通过硅烷对粒子表面进行氨基,醛基,羧基和螯合配体(IDA)的修饰。针对硅烷修饰量少,表征困难的问题,分别为各种基团建立了简单有效的定性和定量方法,并通过定量法研究了粒子修饰层的稳定性。 2.区别于常规的单羧基修饰,对Fe3O4/SiO2磁性复合粒子进行双羧基修饰。并将双羧基修饰的粒子用于带正电蛋白质的分离纯化。 3.将固定金属离子的Fe3O4/SiO2-IDA粒子用于His-tag蛋白的分离纯化。研究了粒子的稳定性和重复使用性,克服文献中报道的粒子使用后稳定性和可重复性差的缺点。 4.针对用于磷酸化蛋白分离富集的IMAC基质的缺陷,本论文选用纳米尺寸的磁性复合粒子为基质合成了Fe3O4/poly(St-co-MPS)/SiO2-IDA-Fe3+复合粒子,并将其用于磷酸化蛋白的分离富集。与常用方法相比,该粒子具有更高的纯化效率。


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