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组氨酸为活性中心的蛋白质酪氨酸磷酸酶和细胞自噬标记物的研究

徐越驰  
【摘要】: 蛋白质的磷酸化与去磷酸化调控着人体重要的生物学功能,与许多人类的疾病密切相关。本论文主要以一类新型的蛋白质酪氨酸磷酸酶——T细胞受体信号通路抑制因子1和2(STS-1/2)为目标,对它们的生物学功能进行探索。本研究克隆了STS-1/2的催化结构域,并在大肠杆菌表达系统中表达出融合蛋白,通过柱层析色谱技术,分离纯化得到了高纯度的融合蛋白。通过体外酶促反应动力学分析,确定了STS-2的最适酶促反应条件为pH=4.0,NaCl浓度为0。应用带有GST标签的融合蛋白模拟体内的二聚体结构,发现了STS-2对STS-1的磷酸酶活性具有一定的抑制作用。本文证明了以组氨酸为活性中心的STS-1/2具有蛋白质酪氨酸磷酸酶的活性,并且发现两种蛋白间存在相互抑制的作用。另外,本论文还对小鼠mLC3b蛋白在细胞自嗜的标记物的应用上进行了研究,我们克隆、表达了小鼠mLC3b蛋白,通过与绿色荧光蛋白形成嵌合体,我们对mLC3b在细胞中进行定位。结果表明,当在哺乳动物细胞中表达的时候,mLC3b分布在细胞质中;当诱导细胞自嗜现象产生的时候,mLC3b则发生聚集并与细胞自嗜小体发生结合。研究表明,mLC3b可以作为标记细胞自嗜的标记物在生物学研究中广泛应用。


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