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SiRNA-Stat3联合Endostatin共表达质粒的构建及其治疗前列腺癌的初步研究

李馨  
【摘要】: 目的:构建siRNA-Stat3和Endostatin共表达质粒pEndo-Si-Stat3,观察应用减毒沙门氏菌携带共表达质粒治疗小鼠前列腺癌效果,并探讨其作用机制。 方法:利用基因重组技术构建pEndo-Si-Stat3共表达质粒,应用电转化技术将其转至减毒沙门氏菌,尾静脉注射入小鼠体内,观察其治疗小鼠前列腺癌皮下移植瘤的效果。半定量RT-PCR和Western blot实验分别检测Stat3、Endostatin及相关基因Bcl-2和VEGF的mRNA及蛋白表达水平。ELISA实验检测肿瘤组织Endostatin含量。TUNEL染色检测细胞凋亡。免疫组织化学检测Stat3、Endostatin、Caspase3、PCNA、CD34蛋白表达水平。 结果:经酶切和测序鉴定,成功构建了共表达质粒pEndo-Si-Stat3,实验证实其能上调Endostatin,同时下调Stat3表达。菌落分布实验表明应用减毒沙门氏菌携带共表达质粒能够有效聚集在肿瘤组织。与对照组相比共表达质粒组肿瘤体积明显缩小,肿瘤重量减轻。TUNEL染色检测显示共表达质粒组出现显著凋亡。半定量RT-PCR和Western blot实验证明共表达质粒组Bcl-2和VEGF的表达受到抑制。免疫组织化学检测共表达质粒组Caspase3蛋白表达增高,PCNA、CD34蛋白表达降低。 结论:成功构建共表达质粒pEndo-Si-Stat3。应用减毒沙门氏菌携带共表达质粒对肿瘤细胞有抑制增殖、促进凋亡的作用。其机制可能是siRNA-Stat3和Endostatin联合应用可下调Bcl-2和PCNA的表达,并上调Caspase3蛋白表达,最终促进肿瘤细胞凋亡;同时使VEGF和CD34蛋白表达下调,从而抑制内皮细胞增殖及新生血管生成,最终抑制肿瘤生长。


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