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具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的人源含硒单链抗体Se-scFv-2D8催化位点的研究

于扬  
【摘要】: 谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase, GPx)是生物体内一类重要的抗氧化酶,它能够清除机体内的脂质氢过氧化物(ROOH)以及促进过氧化氢(H2O2)分解,保护组织免受过氧化损伤,对防治由ROS引起的多种疾病有潜在的药用价值。但由于天然GPx来源有限、稳定性差以及分子量较大等缺点,使其无法通过基因工程方法大量表达。因此人们转向研究GPx的人工模拟,但由于没有考虑到底物的结合作用,早期GPx模拟物如Ebselen等活力普遍偏低。单链抗体酶技术是产生具有高活力GPx模拟物的有效方法,本课题组通过噬菌体展示技术筛选得到抗GSH人源单链抗体scFv-2D8,利用化学突变引入硒代半胱氨酸(Sec),获得具有GPx活力的人源单链抗体酶。为找出该抗体酶催化位点,我们以scFv-2D8为基础,与吉林大学理论化学计算国家重点实验室郑清川老师课题组合作,通过同源模建法及分子对接模拟推测出scFv-2D8的底物结合位点和活性基团,通过定点突变技术将预测出的关键氨基酸突变为无关氨基酸。将野生型单链抗体酶及其突变体进行化学诱变后,比较GPx活力变化,进而确定Se-scFv-2D8的催化位点。


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