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IL-24基因对B16细胞移植瘤抑制作用的探讨

牟斌  
【摘要】:目的:研究重组质粒pEGFP-N1-IL-24基因对黑色素瘤B16细胞小鼠移植瘤的抑制作用及作用机制。 方法: 取6周龄C57BL/6小鼠,于背部注射5×106cell/mL黑色素瘤B16细胞悬液0.2mL。将构建成功的黑色素瘤B16细胞小鼠模型,随机分为3组,分别向瘤体内注射脂质体包裹的基因重组质粒pEGFP-N1-IL-24(实验组),pEGFP-NI(阴性对照组)和PBS缓冲液(阴性对照组)。共注射4次,每3d注射一次。最后一次注射7d后,处死小鼠,取肿瘤组织。每只小鼠肿瘤组织分成3份,分别应用HE染色对肿瘤组织形态进行观察,RT-PCR法测定移植瘤中Bax,Bcl-2和VEGF三种mRNA的表达,Western Blot;方法研究肿瘤细胞凋亡情况。其中RT-PCR与Western Blot方法所测定的结果,各mRNA和蛋白的表达量均用灰度值表示,并且通过内参的灰度值进行校正,以相对灰度值进行体现。数据用SPSS19.0进行分析,结果用x士s表示。 结果: 1.在小鼠接种黑色素瘤B16细胞后,约12d接种背部均产生0.05cm左右的瘤体,证明造模成功。 2.经HE染色发现实验组肿瘤组织有细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂。 3.在三组肿瘤组织中,分别提取了总RNA,进行了RT-PCR实验,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测。实验组Bax基因的表达明显高于其他两组(P0.05),而实验组Bcl-2和VEGF基因的表达又明显低于其他两组(P0.05)。 4.在三组肿瘤组织中,分别提取蛋白,进行Western Blot实验。实验结果表明,实验组Bax蛋白的表达明显高于其他两组(P0.05),而实验组Bcl-2和VEGF蛋白的表达又明显低于其他两组(P0.05)。 结论: 1.IL-24对小鼠体内的黑色素瘤B16的生长有一定的抑制作用; 2.IL-24在黑色素瘤组织中能促进Bax基因的表达,而Bcl-2、VEGF基因的表达受到抑制; 3.IL-24在黑色素瘤组织中能促进Bax蛋白的表达,而Bcl-2、 VEGF蛋白的表达受到抑制。


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