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RAPD在梨品种资源及苹果梨分类上的应用研究

金香兰  
【摘要】: 本试验以RAPD为研究方法,对梨属种质资源的秋于梨、白梨、砂梨和西洋 梨四个系统的40个品种进行了分类研究,并对苹果梨的分类地位进行了探讨.结 果表明: 在试验中,采用对SDS法可快速提取较高质量梨基因组总DNA用于扩增.并从 100个引物中筛选出12个10碱基随机引物,它们的多态性百分级大多在90%以上。 确定了最适RAPD反应体系:总体积为25 μL,其中模板DNA 100ng,MsCl_2 2.0mmol/L, dNTP 200 μ mol/L,TaqDNA聚合酶1U,primer 8pmol,剩下的用重蒸节水来填充. 扩增程序为:94℃预变性2分钟;94℃变性l分钟,37℃ 退火1.5分钟,72℃延伸 2分钟,5个循环;94℃变性0.5分钟;37℃退火1分钟,72℃延伸1.5分钟,40 个循环;最后72℃延伸10分钟。同时建立了40个品种的RAPD指纹图谱。并确定 用引物OPH09和OPG01、OPH09和TG14、OPG09和OPI16以及三个以上的引物结合 可区分开全部供试材料。 对梨属40个品种及类型进行了RAPD扩增,根据相似系数进行了聚类分析, 能将起源于欧洲的西洋梨与起源于中国的3个种明显区分开,起源于中国的3个种 虽未完全各自聚类,但各材料间都有不同的遗传距离,证明RAP D技术可作为梨 种质分类鉴定的依据。 通过聚类分析树状图及苹果梨和其他品种的相似系数表明:苹果梨和日梨系统 的品种亲缘关系较近,并和白梨系统的鸭梨、汤山酥梨、栖霞大香水聚在一起,认 为苹果梨在遗传关系上和白梨系统有很大的相似性.同时用15个代表性品种来进 行RAPD分析,用引物 0PA08和OPA18可以鉴别供试的 15个品种,聚类分析结果苹 果梨仍然和白梨系统聚在一起。这证明了苹果梨应归属于白梨系统而不应归属于砂 梨系统。 RAPD分析发现谢花甜与砂梨系统和白梨系统的部分品种聚合在一起,说明这 花甜属于秋子梨系统的分类地位有待于进一步研究。


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