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N-糖链新受体的开发及其应用

国营  
【摘要】: 近年,因N-连接糖链对细胞癌症的发生和转移、以及造血功能有密切关系,因而,其结构与生物功能之间关系研究倍受人们的关注。为了这些研究能够顺利进行,不仅需要研制开发相关糖类分析仪器,而且更急需开发糖链相关试剂和新的简便、高灵敏、高选择性的N-连接糖链分析方法。 从冷冻的毛霉菌中提取出来的内-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶M (Endo-M酶)具有切断N-连接糖链五糖核心最内侧的两个N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc-GlcNAc)之间的糖苷键,将其中一个GlcNAc留在多肽链上,并把释放出来的糖链转移到另外一个含有GlcNAc残基的受体上的特性。根据Endo-M的这些特性,设计合成了既含有GlcNAc又含有电活性基团的受体,优化了各受体的合成以及纯化方法,初步探讨了在糖链转移酶Endo-M作用下各种受体与N-连接糖链的转移结合过程,由于所合成的受体易离子化或已带电荷,所以可以提高糖链衍生物在质谱检测器上的灵敏度。我们还进行了实际样品卵清蛋白的检测,用糖链酶解霉E酶切卵清蛋白,提取了N-糖链,并且检测了卵清蛋白中所含有的一些N-连接糖链。 将合成的衍生化试剂PDPZ应用于羧酸类物质的检测,摸索了最佳衍生化方法,建立了一种简便、快速的HPLC检测方法。


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