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人参皂苷微生物转化及其抗肿瘤活性研究

康东周  
【摘要】: 现代医学和药理学研究证明,人参皂苷具有调节免疫系统、降低血清中的胆固醇含量、防治心血管疾病、消炎解毒等功效。尤其是人参皂苷单体,如Rg3,Rh2等更是有极佳的抗肿瘤生物活性。但是这种人参皂苷单体在人参中含量极少,甚至有些人参中并没有这些稀有皂苷的存在,并且在人体内吸收率很低,价格昂贵因此就会限制临床应用。目前,人参皂苷没有实现化学的全合成,其单体的应用也只能是从人参中分离得到,并且要得到比较纯的单体的过程是复杂而艰难的。但随着生物技术的发展,将生物转化技术应用于人参稀有皂苷的制备中,利用微生物转化法对人参皂苷进行生物代谢,以提高稀有皂苷含量,也增强它的生物利用度。本论文利用微生物发酵法对人参皂苷进行生物转化,通过对多种微生物进行筛选,并且生物转化产物通过TLC、HPLC方法进行检测。实验结果表明从土壤中分离的微生物YS-7和既存微生物KL-1对人参皂苷具有良好的转化能力。 其次,我们将转化的产物进行处理后,通过对小鼠免疫系统的影响来考察发酵人参的体外活性。本文在Colon26-M3.1肿瘤细胞体外毒性实验中,干参发酵产物(gKL-1~gKL-4)比鲜参发酵产物(xKL-1~xKL-4)显示出较高的细胞毒性。小鼠腹腔内巨噬细胞活性与细胞因子的测定说明了药物对肿瘤转移具有抑制作用,并且能够促进造血细胞增殖。 再次,体内动物实验考察了发酵人参腹腔注射和口服给药对肿瘤转移预防作用和对S180肉瘤抑制作用,测定肿瘤重量以及相关免疫器官脾脏和胰腺的重量,实验结果人参发酵物FYS-7显示出了良好的肿瘤抑制效果,对小鼠S180肉瘤的抑制率在高中低剂量时,分别为53.03%、34.51%、27.67%。实验结果可以说明发酵人参在高剂量时对S180肉瘤抑制作用最为明显。在中、高剂量时,小鼠的脾脏和胰腺接近于正常小鼠。说明了发酵人参能够抑制小鼠S180肉瘤生长。 第四,结合形态学观察、DNA的测序及系统发育树分析,对生物转化菌株YS-7进行了分类与鉴定,该菌株归属于链霉菌属(Streptomyces). 最后,发酵人参FYS-7通过口服给药能够刺激免疫系统的Peyer's patch显示可观的效果,给予xKL-1和FYS-7 500 ug/ml时对派伊尔淋巴集结细胞的增值是最为有利的。也对机体产生免疫反应起到最强的活化作用。旨在选择出优良菌株对人参皂苷进行生物转化,为发酵人参保健食品的开发提供科学依据。


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