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一种高效检测石蜡切片中的DNA的方法研究

杨青喜  
【摘要】:为了克服传统石蜡标本中DNA较高的假阴性检测率,提高检出率准确性,本文从提高PCR反应效率和提高石蜡标本DNA抽提质量两方面进行研究。 本文对12种PCR添加剂进行了研究。结果显示:海藻糖、DMSO、DTT、亚精胺、谷胱甘肽、甜菜碱都可以提高PCR反应效率和稳定性,建立了一种新型的荧光PCR反应检测体系。 本文使用碱裂解法、TE溶液加热脱蜡及蛋白酶K与Chelex共同消化的方法对石蜡标本的DNA进行抽提。结果发现:石蜡标本经TE溶液加热脱蜡后Chelex与蛋白酶K共同消化处理获得的DNA可以较好的满足PCR检测的需求,其DNA检测结果与Qiagen试剂盒抽提的DNA的检测结果基本一致。建立了一个新的用于提取石蜡标本中DNA的方法。 本文将500例石蜡标本进行抽提与检测。结果显示,新的抽提方法和新型荧光PCR反应体系对石蜡标本中DNA的检出率为94%(471/500),明显地增加了石蜡标本中DNA的检出率,可靠性强。 研究表明:新构建的荧光PCR反应体系及石蜡标本DNA抽提方法可以满足普遍石蜡标本的检测要求,为以后石蜡标本的研究提供了一个较为可靠的检测平台。


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