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葡萄糖氧化酶基因的克隆及高效表达

李卓夫  
【摘要】: 本文从一株产葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,简称GOD)的点青霉中克隆得到了葡萄糖氧化酶编码序列,构建了高效表达、有效分泌的葡萄糖氧化酶的重组毕赤酵母生物反应器,这为开发高效生产葡萄糖氧化酶的生物技术提供途径。序列分析表明,该葡萄糖氧化酶基因长1815bp,共编码604个氨基酸,前18个氨基酸为信号肽编码序列,氨基酸序列中共有4个潜在的糖基化位点。将克隆得到的葡萄糖氧化酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中进行表达,构建出GOD的高产酵母菌株。在酵母α-Factor及AOX1启动子和终止子(TT)的调控下,点青霉GOD在GS115中大量表达并分泌到胞外。在3L发酵罐水平检测条件下,甲醇诱导132小时,发酵液中的酶活达到111.3U/mL。


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