GFRα1在帕金森病动物模型中表达量的变化及其基因的克隆与表达

【摘要】：目的：神经系统疾病近年来成为困扰人类健康的一大难题,给人类的生活带来了极大的影响,尤其是随着人口老龄化的出现,像帕金森病、癫痫、阿尔茨海默症、脑缺血等神经系统疾病的发病率也随之增加,严重影响了老年人的晚年生活质量,因此,众多研究人员致力于神经系统疾病的治疗及机制的研究。近年来发现GFRα1作为胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的主要受体,并且GFRα1与帕金森病、癫痫、阿尔茨海默症、脑缺血等众多神经疾病的发病过程有关,引起了人们重视,成为了治疗神经系统疾病研究的一个新的焦点。因此本实验制作了帕金森(PD)大鼠模型,观察PD大鼠纹状体内GFRα1的含量变化,通过克隆得到GFRα1基因,并进行原核表达得到了GFRα1蛋白,为神经系统疾病的治疗及发病机制的研究提供实验依据。 方法：采用立体定向术按照双靶点注射方法将6-OHDA注入大鼠右侧纹状体内,制备PD动物模型。取成功的PD大鼠模型,通过HE染色、免疫组化分析,观察神经元大小、形态的变化以及GFRα1表达量的变化,利用Image-pro6.0分析表达阳性面积,计算其IOD值,利用SPSS13.0对数据进行一维方差分析。并以胎鼠大脑为材料,得到鼠脑总RNA,采用RT-PCR扩增GFRα1全长序列,构建pET-30a-GFRα1表达载体,在大肠杆菌中表达,。 结果：成功制作了PD大鼠模型,通过免疫组化,观察到PD组脑中损毁侧的GFRα1表达量减少,与对照组比较差异显著,P0.05。通过RT-PCR获得了GFRα1基因的全长序列,并通过大肠杆菌得到表达,经Western-blot鉴定得到了一条明显的单一蛋白印迹条带。 结论：GFRα1在PD大鼠模型纹状体中表达量较对照组下降,成功表达了GFRα1蛋白。