收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪带绦虫六钩蚴HSP的克隆表达及差异蛋白研究

王哲  
【摘要】:猪带绦虫(Taenia solium)是一种重要的人兽共患寄生虫,其六钩蚴发育成囊尾蚴可引起人和猪的囊虫病。寻找六钩蚴发育成囊尾蚴的过程中关键因子或者差异蛋白变化将可能解释六钩蚴发育成囊尾蚴的生长变化规律,以及可能揭示六钩蚴突破宿主肠粘膜机理。而热休克蛋白(HSP)则跟生物体生长、蛋白合成及适应外界刺激有密切关系。本实验成功构建了pET28a-HSP重组抗原,为研究寄生虫热休克蛋白与宿主关系提供理论基础。1.激活的和未激活总蛋白分离及差异蛋白分析鉴定 本实验通过二维液相蛋白分离系统(2D-LC)对模拟肠道环境体外激活和未激活的猪带绦虫六钩蚴总蛋白进行分离,在pH值7.71-5.31范围内成功获得已激活的总蛋白208个,未激活总蛋白197个,其中相同共有164个,相对激活的差异蛋白共有44个,相对未激活的蛋白共有33个,根据已发布的热休克蛋白的等电点及疏水性等特点,选取5个已激活的差异蛋白进行蛋白质肽质量指纹谱的分析,成功鉴定了猪带绦虫磷酸甘油醛脱氢酶蛋白和小热休克蛋白(HSP),其它三个未鉴定出序列。2.HSP目的基因的克隆和测序 分别提取猪带绦虫激活和未激活六钩蚴总RNA, RT-PCR扩增HSP目的基因,将目的基因与pGH克隆载体连接,经酶切鉴定后,将阳性重组质粒进行测序,结果扩增出激活的六钩蚴的目的片段,未扩增出未激活的六钩蚴的目的片段,与分离出的小热休克蛋白结果一致。测序分析证明本试验扩增的基因序列与Genbank上发表的猪带绦虫六钩蚴热休克基因核苷酸序列同源性为100%,与鉴定出的小热休克氨基酸序列一致。说明成功克隆了猪带绦虫六钩蚴小热休克蛋白序列。3. pET28a-HSP重组抗原的表达 将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-28α中,并将获得的pET28a-HSP阳性重组子转化至宿主菌E.coliBL21,IPTG进行诱导表达,并对重组抗原pET28a-HSP进行SDS-PAGE和Western-blot检测。结果表明重组经SDS-PAGE分析可见一条约35kDa大小的融合蛋白条带的抗原,Western-blot结果显示其能被囊虫病人阳性血清识别。这将为进一步阐明六钩蚴入侵中间宿主的机理、设计新型抗猪囊虫病和绦虫病疫苗打下基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 马全英;王颖;丁军涛;岳城;才学鹏;;猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的克隆与序列分析[J];中国兽医科学;2007年08期
2 丁军涛;陈晓宇;骆学农;王颖;张少华;刘斌;郑亚东;景志忠;才学鹏;;表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18抗原的重组活载体疫苗株的构建[J];中国农业科学;2008年12期
3 方强;孙新;;猪囊尾蚴病疫苗研究进展[J];蚌埠医学院学报;2006年02期
4 骆学农;郑亚东;吴旭刚;窦永喜;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫六钩蚴45W-4BX的高效表达、纯化及活性分析[J];中国兽医学报;2006年01期
5 张艳;景志忠;刘振勇;乔军;才学鹏;;猪囊虫和猪带绦虫病实验动物模型的研究进展[J];中国兽医寄生虫病;2007年04期
6 丁军涛;骆学农;王颖;张少华;陈晓宇;郑亚东;景志忠;才学鹏;;Tsol18基因密码子优化对其表达及重组蛋白免疫效果的影响[J];畜牧兽医学报;2009年03期
7 郭爱疆;才学鹏;房永祥;贾万忠;骆学农;刘红霞;;猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究[J];畜牧兽医学报;2008年07期
8 刘永杰,郝艳红,李庆章;猪带绦虫六钩蚴的体外培养[J];华中农业大学学报;2002年03期
9 马全英;骆学农;王颖;丁军涛;岳城;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的表达及免疫原性分析[J];中国预防兽医学报;2007年12期
10 吴国华;郑亚东;贾万忠;张少华;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫10ku蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其初步应用[J];畜牧兽医学报;2008年10期
11 陈晓宇;丁军涛;骆学农;王颖;刘斌;张少华;郑亚东;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫TSOL18-SP蛋白的原核表达及其多抗的制备[J];甘肃农业大学学报;2008年06期
12 郭爱疆;吴润;贾万忠;刘斌;闫鸿斌;骆学农;才学鹏;;猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究[J];畜牧兽医学报;2010年02期
13 骆学农;郑亚东;胡志敏;丁军涛;张少华;侯俊玲;窦永喜;郭爱疆;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫45W-4BX和TSOL18的高效表达及免疫效果研究[J];畜牧兽医学报;2008年02期
14 骆学农;郑亚东;窦永喜;郭爱疆;侯俊琳;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析[J];中国农业科学;2007年02期
15 张少华;李克生;景志忠;杜惠芬;骆学农;才学鹏;;猪带绦虫六钩蚴重组蛋白TSOL18与BSA偶连蛋白的制备[J];甘肃农业大学学报;2007年03期
16 王海鸿,雷仲仁;昆虫热休克蛋白的研究进展[J];中国农业科学;2005年10期
17 李海燕;王茜;苏志国;熊平;汪浩勇;;热休克蛋白增加运动发酵单胞菌乙醇产量的研究[J];现代农业科学;2009年04期
18 陶丹,尹田夫,王萍,宋海星,马淑英,李吉平,张让堂;野生大豆(Glycine soja)热击蛋白(HSP)的研究 Ⅱ.松花江下游和长江下游地区野生大豆HSP诱导合成的比较[J];大豆科学;1998年04期
19 袁改玲,才学鹏,景志忠,郑亚东,骆学农,贾万忠,李辉,丁军涛;猪囊尾蚴疫苗候选基因TSO18在酵母中的高效表达[J];生物工程学报;2005年04期
20 唐雨德;顾志香;雷永红;翟春生;刘玉;郁兴明;;以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组抗原的复性与纯化[J];中国农业大学学报;1998年S2期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王哲;赵权;;猪带绦虫六钩蚴HSP克隆和表达及差异蛋白研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
2 丁建芳;李苍松;何发亮;;HSP声波反射法地质勘察技术研究[A];第八届全国工程地质大会论文集[C];2008年
3 张宝;陈宏;Hasan khatib;;荷斯坦奶牛HSP基因表达差异研究及其遗产变异与繁殖性状的关联分析[A];中国畜牧兽医学会养牛学分会2011年学术研讨会论文集[C];2011年
4 李苍松;谷婷;丁建芳;于维刚;何发亮;;适合于TBM施工的HSP声波反射法地质超前预报[A];第八届全国工程地质大会论文集[C];2008年
5 胡玲;王洪琦;成晓燕;;白花蛇舌草对肝癌H22细胞HSP_(70)表达的影响[A];肝脏病防治学术研讨会及新进展学习班专刊[C];2005年
6 聂华明;谢跃;付彦;陈林;农向;古小彬;王淑贤;杨光友;;脑多头蚴HSP基因的原核表达及胶体金渗滤法(DIGFA)的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
7 刘凯;李应东;;当归、红芪超滤膜提取物对H_2O_2损伤人脐静脉内皮细胞HSP_(70)mRNA表达的影响[A];第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省中西医结合学会心血管病学术大会论文汇编[C];2010年
8 吕庆利;杨传凤;张成建;袁希强;隋岩;;新一代天气雷达硬件信号处理器测试与故障诊断[A];第26届中国气象学会年会第三届气象综合探测技术研讨会分会场论文集[C];2009年
9 杨传凤;刘志红;袁希强;隋岩;;CINRAD/SA雷达硬件信号处理器测试与故障隔离诊断[A];中国气象学会2008年年会卫星遥感应用技术与处理方法分会场论文集[C];2008年
10 王珊;高志红;章镇;徐军霞;侯计华;;果梅完全花与不完全花的差异蛋白分析(摘要)[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨帆;腹型HSP儿童血清差异蛋白质组学的研究[D];吉林大学;2012年
2 丁军涛;表达Tsol18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建及其免疫学研究[D];中国农业科学院;2008年
3 张宝;黄牛HSP家族基因差异表达及经济性状相关基因遗传变异研究[D];西北农林科技大学;2011年
4 罗勇;瘢痕疙瘩差异表达基因的筛选及标志蛋白的分析[D];第一军医大学;2005年
5 冯华;1.实验性蛛网膜下腔出血后脑继发性损害的病理基础与药物干预研究 2.大鼠实验性微波辐照后BBB损伤的特点与药物治疗的初步研究[D];第四军医大学;1997年
6 周继红;应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术筛选肺癌差异蛋白的研究[D];广西医科大学;2010年
7 周洲;肺炎嗜衣原体热休克蛋白经ERK、NF-κB信号通路调控HUVEC分泌炎症因子[D];南华大学;2011年
8 胡风华;基于以太网的存储系统研究[D];中国科学院研究生院(计算技术研究所);2005年
9 李玉保;长途运输应激猪组织损伤与hsps mRNA转录、HSPs表达相关性研究[D];南京农业大学;2006年
10 李莉;蛋白质组学技术对胃癌、肝癌、卵巢癌血清差异蛋白表达的研究[D];新疆医科大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王哲;猪带绦虫六钩蚴HSP的克隆表达及差异蛋白研究[D];吉林农业大学;2011年
2 常雪莲;猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因密码子优化真核载体的构建及其在体内、外表达的实验研究[D];安徽医科大学;2010年
3 马全英;猪带绦虫六钩蚴TSOL16基因的克隆、表达与免疫原性分析[D];新疆农业大学;2007年
4 陈晓宇;表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建[D];甘肃农业大学;2008年
5 陈水福;HSP_(70)/内源性抗过氧化酶介导的阿魏酸钠对急性心肌细胞损伤的延迟保护作用[D];南昌大学;2009年
6 廖旭东;公牛HSP基因多态性与精液品质及后裔性能的相关分析[D];南京农业大学;2011年
7 兰恒宇;乙酰淀粉填充水性高分子异氰酸酯胶粘剂研制及HSP表征[D];东北林业大学;2010年
8 罗红霞;HSP表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性研究[D];重庆医科大学;2005年
9 王瑞娴;家蚕HSP基因的表达调控研究[D];苏州大学;2011年
10 龙强;龙眼(Dimocarpus longan Lour.)成花逆转蛋白质组学的初步研究[D];福建农林大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 曾利群;和利时自动化系统出新[N];中国高新技术产业导报;2000年
2 中国网通公司 薛晨 王安;国际IDC市场的启示[N];中国计算机报;2001年
3 记者 高岚;网擎:按级别给服务[N];中国计算机报;2000年
4 江苏省通信管理局 薛兴华;网络安全亟待法律防范[N];通信信息报;2002年
5 吴一福;军事医学科学院从MSCs中筛选出重要差异蛋白[N];中国医药报;2006年
6 薛兴华;构筑网络信息安全法律长城[N];人民邮电;2002年
7 本报记者 顾洪文;宽带上的IDC[N];计算机世界;2002年
8 本报记者 筱华;搏击民企一片天[N];中华建筑报;2001年
9 ;IS-95 CDMA的发展状况[N];人民邮电;2001年
10 本报记者 姜艳青;中国网通 发力IDC[N];通信产业报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978