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平贝母愈伤组织和不定芽的四倍体诱导研究

王凯萍  
【摘要】:贝母在我国作为药用植物使用已经有十分悠久的历史,贝母为百合科贝母属植物,是我国中药材中重要属别之一。贝母按产地区分,生药被划分为浙贝母、川贝母、平贝母和伊贝母4种。贝母既可作药用治疗疾病,也可作为观赏植物观赏,随着对贝母研究的日益深入,其应用价值还在不断被研究者们挖掘。 平贝母(Fritillaria usurionsis Maxim)在长期的人工栽培过程中,逐渐出现了多种植物退化问题,所以寻找更为有效的平贝母人工种植技术,筛选出具有产量高、抗逆性强、有效成分含量高的品种和类型应用于生产实践,是平贝母生产中亟待解决的问题。本文对平贝母鳞茎进行愈伤组织以及不定芽诱导的基础上,对愈伤组织和不定芽还进行了四倍体诱导,为提高平贝母自身的种质特性,生产出优良的繁殖材料提供良好的理论基础。 本试验主要在生物技术的指导下,对平贝母愈伤组织和不定芽的诱导培养基进行优化与筛选。首先,在大量阅读相关文献的基础上,筛选出基础培养基MS培养基为平贝母愈伤组织的诱导培养基,后采用正交试验法筛选愈伤组织诱导的最佳激素种类和浓度配比。分别将诱导出的愈伤组织以及不定芽进行四倍体诱导,并且制定不同的秋水仙碱浓度以及诱导方法,筛选出平贝母四倍体诱导的最佳秋水仙碱浓度以及最佳诱导方法。 通过检测愈伤组织和不定芽的增重,细胞学鉴定等方法,得到以下结论:(1)确定平贝母愈伤组织最佳诱导培养基为MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.9mg/L+NAA0.5mg/L;最佳继代培养基为MS+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.3mg/L;(2)确定平贝母不定芽最佳诱导培养基为MS+KT0.8mg/L+NAA0.3mg/L.(3)利用诱导出的愈伤组织进行四倍体诱导,秋水仙素加入培养基法对愈伤组织进行多倍体诱导的最佳条件为:秋水仙碱浓度为在800mg/L处理2d时达到相对较高的诱导率41.5%;(4)秋水仙素溶液浸泡法对愈伤组织进行多倍体诱导最佳条件为:秋水仙素浓度达到400mg/L、处理时间为48h时的诱导效果最好,达到27.3%。(5)平贝母不定芽多倍体诱导最佳条件为:秋水仙素浓度达到800mg/L,诱导效果最好,其诱导率高达17.4%。(6)细胞生物学鉴定:二倍体细胞染色体2n=2x=24,四倍体为2n=4x=48。


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