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利用红花和拟南芥油体表达表皮生长因子的研究

周婷婷  
【摘要】:表皮生长因子(Epidermal growth factor)是一个含有53个氨基酸残基的单链多肽,相对分子量较小约为6.04kDa。它具有促进细胞分化、增殖等作用。因此在临床方面可以广泛应用于促进伤口愈合,治疗溃疡等,同时也可添加于化妆品中,具有刺激人体皮肤新陈代谢,延缓衰老等功效。 利用植物系统大规模生产药用蛋白,一直是现如今研究的热点问题。而利用植物油体蛋白表达药用蛋白不但可以降低生产成本,还可以简化分离纯化工艺,为大规模生产药用蛋白奠定了坚实基础。 本研究利用植物油体系统(拟南芥、红花)表达EGF,按照密码子偏好性改造EGF,合成得到大肠杆菌偏好单基因EGF (cEGF)、植物偏好单基因EGF (pEGF)和植物偏好双基因EGF (pdEGF)。并将三个基因分别插入到pOBT表达载体中,连接到油体蛋白的3’端形成融合蛋白,将三个质粒分别转入根癌农杆菌EHA105中,分别利用Floral dip法和农杆菌介导法,侵染拟南芥和转化红花,将三个基因分别转入拟南芥和红花中。 经过对三种转基因拟南芥植株进行分子生物学检测,表明三种融合蛋白基因已成功转入到拟南芥中,且得到表达,转基因株系分别为cEGF4株,pEGF4株,pdEGF9株。经过Elisa检测,结果表明用基因串联和对密码子偏爱性改造的方法可以提高目的蛋白的表达量。 由于红花生长周期长,生根率低等困难,仅有的7株转入pEGF的红花PCR验证为阳性的植株,但由于没有存活、假阳性等原因,经southern检测仅有一株pEGF基因已整合到红花基因组中。 本研究为拟南芥的培养条件和红花作为受体植物表达其他外源蛋白提供了技术支持,为利用植物生物反应器生产药物奠定了良好的基础。同时本研究不但将EGF促进伤口愈合和红花的活血通经、散瘀止痛和治疗跌打损伤等功效累加,而且可直接用于外伤修复。既节省了药物分离纯化的成本,同时又增加了药物的疗效。


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