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紫穗槐根异黄酮的提取、分离及抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

赵昱玮  
【摘要】:紫穗槐Amorpha fruticosa L.为豆科(Leguminosae)紫穗槐属,花,清热、凉血、止血;叶,微苦、凉,具有祛湿消肿功效,主治痈肿、湿疹、烧烫伤。本论文对紫穗槐根进行了较为系统的研究,包括紫穗槐根总异黄酮提取、纯化工艺、化学成分分离纯化及对抑制α-葡萄糖苷酶活性作用等方面,为紫穗槐资源的开发与利用提供参考依据。通过查阅国内外相关文献,对紫穗槐的主要化学成分及其药理作用进行系统的综述,为进一步研究提供参考。以毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷为指标,采用紫外分光光度法测定提取物中异黄酮类化合物的含量,通过单因素试验确定影响紫穗槐根总异黄酮提取率的主要因素,利用Box-Behnken响应面法优化紫穗槐根总异黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇体积分数为70%,料液比为1:13,提取时间为3 h,提取次数为3次,在此条件下紫穗槐根总异黄酮提取率为5.59%。通过考察不同型号的大孔树脂,确定了以D101大孔树脂进行紫穗槐根总异黄酮的最佳纯化工艺,纯化后的紫穗槐根总异黄酮含量达到70%以上。建立了紫穗槐根总异黄酮HPLC特征图谱,对总异黄酮化学成分进行了分离、纯化,最终分离得到6种化合物,分别为:毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(calycosin7-O-β-D-glucopyranoside)、毛蕊异黄酮(7,3'-dihydroxy-4'-methoxyisoflavone)、Dalbinol、amorphigenin、芒柄花素(7-dihydroxy-4'-methoxyisoflavone)、芒柄花苷(4',7-dihydroxy-7-O-glucopyranoside)。建立了以4-硝基苯酚-α-D-吡喃葡萄糖(PNPG)为底物、大鼠小肠源α-葡萄糖苷酶为反应酶的体外筛选模型,对紫穗槐根乙醇提取物、纯化后的总异黄酮及分离得到的六个单体化合物进行体外抑制α-葡萄糖苷酶活性筛选,结果表明,纯化后总异黄酮对α-葡萄糖苷酶抑制活性优于阳性对照药阿卡波糖,化合物Dalbinol、amorphigenin与阿卡波糖相近。创新点:1、首次系统地对紫穗槐根总异黄酮及其化学成分进行抑制α-糖苷酶的活性研究;2、首次明确紫穗槐根中具有抑制α-糖苷酶作用的活性成分;3、纯化后总异黄酮收率为5.4%,含量在70%以上,符合中药5类新药的要求,为新药开发奠定基础;4、通过研究确定了紫穗槐根新的药用资源及在制备α-糖苷酶抑制剂药物中的应用。


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