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维氏气单胞菌分离鉴定及防治研究

冷东泽  
【摘要】:随着水产养殖业高速发展,鱼出血性败血症,常引起鱼类的死亡,为水产养殖行业带来经济损失。鱼出血性败血症为水产养殖业中常见流行病,多由致病性气单胞菌引起。气单胞菌是可引起人、动物、鱼的条件性致病菌,并且在我国广泛的流行。本研究从患出血性败血病死亡的鲫鱼肝脏中分离病原菌,经LB固体培养基划线分离培养后可见圆润光滑边缘整齐的优势生长菌株,挑取单菌落,将其命名为AX002。为进一步确定分离菌的致病性,通过动物回归感染试验测定该菌对鲫鱼的半致死浓度(LD50)为2.38×107cfu/mL。结合观察细菌在RYAN和RS等培养基上的生长状态,在RYAN培养基上可见深绿色有深核,RS培养基上24h生长黄色和绿色菌落,综上可确定为气单胞菌。通过全自动细菌鉴定系统检测AX002的生化结果显示,该菌为维氏气单胞菌温和亚种。经PCR测序该菌16srDNA和促旋酶亚基(gyrB)基因,扩增结果分别是为1 179bp和1 100bp。通过测序结果在NCBI上比对并建立系统发育树分析后,可确定AX002为维氏气单胞菌。生理生化鉴定结果相同。药敏试验结果显示,该菌对阿米卡星、头孢唑啉、复方新诺明、环丙沙星等15种抗生素敏感。该菌对头孢唑啉、氨苄西林和氨苄西林舒巴坦钠三种抗生素药物最低抑菌浓度16μg·mL-1,对四环素最低抑菌浓度8μg·mL-1,结果判定AX002对头孢唑啉、氨苄西林、氨苄西林舒巴坦钠和四环素具有耐药性。同时通过市场常见鱼病药物进行鱼体内外抑菌试验,参照纸片扩散法在LB固体培养基上,24h后可发现,服用药物恩诺沙星、菌清、艾克林特和服乐兴可对维氏气单胞菌AX002产生明显抑菌环(直径大于10mm),五黄粉、三黄散和百炎清对AX002无抑制效果。在投洒药物中,菌毒全消可见明显抑菌环(直径大于10mm),其余(如辛硫磷溶液、绿氧源二氧化氯、聚维酮碘溶液等)无效果或效果不明显。模拟感染防治实验,鱼体腹腔注射药物0.02g,2h后,再腹腔注射0.3ml原菌液,结果显示,恩诺沙星粉(30条鱼死亡2条)和菌清(30条鱼死亡1条)效果最佳,服乐兴和艾克林特同30条鱼死亡4条,生理盐水对照组全部死亡(30条)。


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