收藏本站
收藏 | 论文排版

鹅细小病毒强毒株筛选及病毒样颗粒疫苗的初步评价

杨一鸣  
【摘要】:鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)病,又称小鹅瘟,是一种病毒性传染病,可感染雏鹅和雏番鸭使其发生急性或亚急性败血症。该病疫情广泛、发病率高,雏鹅致死率高,给中国水禽养殖业带来了巨大的经济损失。传统的灭活苗或弱毒苗并不能很好的防控该病,因此本研究计划从目前较为流行的病毒样颗粒疫苗入手,构建GPV的病毒样颗粒疫苗,并对其免疫效果进行评价,为鹅细小病毒的防控提供新方法。收集吉林省多个鹅养殖场疑似感染小鹅瘟病死雏鹅病料,利用鹅胚尿囊液进行病毒扩增培养,随后通过PCR、基因序列分析等方法确定病毒种属地位得到7株GPV病毒,分别命名为LY毒株、SP毒株、ZL毒株、PS毒株、SY毒株、LS毒株、CH毒株,并测定各毒株TCID_(50)、ELD_(50)、LD_(50)及进行致病性实验,筛选出强毒疫苗候选株。结果表明,CH株致死率为60%、LS株致死率为50%,是7株GPV毒株中致死率最高的两株;同时测定的TCID_(50)、ELD_(50)、LD_(50)等试验数据中,CH株与LS株同样表现出较强的致病性,因此CH株与LS毒株作为本实验的疫苗候选毒株,并送往长春市军事兽医研究所进行GPV VLPs疫苗的制备。选取GPV强毒CH株作为攻毒毒株,通过记录各数据统计死亡情况,建立评分标准,构建12日龄雏鹅感染模型,为后续的疫苗评价奠定基础。使用CH毒株对12日龄雏鹅进行攻毒,实验组攻毒浓度分别为800 TCID_(50)、1200 TCID_(50)、1600 TCID_(50),对照组为未攻毒阴性雏鹅,观察并记录雏鹅体温体重情况、临床症状及死亡情况。结果显示:各实验组动物在攻毒后第3 d开始出现小鹅瘟临床症状如食欲不振、精神萎靡等,同时平均体温开始升高、体重开始下降。攻毒后第7 d时各实验组综合临床评分最高,800 TCID_(50)、1200TCID_(50)、1600 TCID_(50)实验组综合临床评分分别为1 CPI、1.6 CPI、2.1 CPI。最终确认GPV CH株感染雏鹅的半数致死的最佳剂量为1200 TCID_(50)。在疫苗评价试验中,对应GPV结构蛋白的不同,共制备6种GPV病毒样颗粒疫苗,分别为GPV VLPs LS VP2 VLPs疫苗、LS VP3 VLPs疫苗、LS-(VP2+VP3)VLPs、CH VP2VLPs疫苗、CH VP3 VLPs疫苗和CH-(VP2+VP3)VLPs GPV VLPs。按照常规免疫程序,将所有实验组疫苗和对照组疫苗免疫动物后,分别对其免疫效果进行评价。收集到免疫后动物血液进行检测,结果表明在第三次免疫10 d后诱导实验动物体液免疫和细胞免疫效果较好的两组分别为CH VP3 VLPs疫苗组及CH-(VP2+VP3)VLPs疫苗组。在攻毒免疫保护实验中,采用CH灭活疫苗、CH VP2 VLPs和CH VP3 VLPs等3种疫苗分别在雏鹅的1日龄及5日龄进行免疫,随后按照动物感染模型的感染标准进行攻毒。结果表明,实验组动物升温范围及体重减轻趋势均得到有效控制,其中CH VP3 VLPs疫苗升温范围、体重减轻幅度均为最小。在攻毒后的实验组综合临床评分与12日龄雏鹅感染模型综合临床评分相比均有所降低且发病较晚,攻毒后第7 d时CH灭活疫苗组、CH VP2 VLPs疫苗组、CH VP3 VLPs疫苗组综合临床评分分别为1.2 CPI、0.6 CPI、0.3 CPI,其中CH VP3 VLPs疫苗组死亡率最低,仅为10%。最终确定病毒样颗粒疫苗CH VP3 VLPs的免疫效果最佳。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 王志强;;一例鹅细小病毒感染的诊治[J];畜牧兽医科技信息;2016年01期
2 刘鹏;笪鸿卫;仇荣军;方霞;;鹅细小病毒病的诊治[J];湖北畜牧兽医;2014年06期
3 黄宇翔;刘力威;李洪彬;王志强;邹越;;鹅细小病毒病、副黏病毒病的流行病学调查及病原分离鉴定[J];中国家禽;2013年02期
4 赵丽荣;张桂红;廖明;;鹅细小病毒的分离鉴定[J];中国兽医杂志;2009年01期
5 邓尚龙;黄仁美;王生育;颜江华;江清银;;鹅细小病毒VP3基因的克隆与表达[J];中国兽医杂志;2009年06期
6 周瑞进,布日额,韩先杰,马波,王君伟;鹅细小病毒免疫血清的制备及其应用[J];中国兽医科技;2004年12期
7 黄伟,佘永建,周光荣,胡世君,周秀富;应用SPA协同凝集试验快速检测鹅细小病毒[J];畜牧与兽医;1988年05期
8 李茂祥;鹅细小病毒[J];中国兽医杂志;1989年08期
9 李金龙;陈丽艳;高敬昕;;一例疑似鹅细小病毒病的诊断和治疗[J];吉林畜牧兽医;2019年12期
10 谢英;黄泽虎;单文杰;汪娟;许翔;刘克东;沈华斌;李烜;付戴波;方柳;熊亚坤;杨珍;于士蒙;石源平;;浅述鹅细小病毒的研究进展[J];江西畜牧兽医杂志;2017年06期
11 黄宇翔;李洪彬;刘力威;王志强;邹越;杨旭东;张军;;鹅细小病毒灭活疫苗的研制[J];中国家禽;2015年07期
12 阿嘎如;;鹅细小病毒感染的实验室诊断技术[J];畜牧与饲料科学;2009年Z2期
13 李福伟;李惠敏;曹顶国;韩海霞;张桂红;;鹅细小病毒的分子生物学研究概况[J];水禽世界;2007年01期
14 文明;李发勋;罗永荣;张霞;李永明;周碧君;;贵州鹅细小病毒感染诊断技术研究[J];西南农业学报;2007年04期
15 陈晓月;赵承辉;;1株鹅细小病毒的分离鉴定[J];中国兽医杂志;2007年02期
16 吴金花;鹅细小病毒感染的PCR诊断[J];黑龙江畜牧兽医;2004年12期
17 钟华,王志世,赵坤;鹅细小病毒感染的诊断与治疗[J];河南职业技术师范学院学报;2002年04期
18 田丽红,王君伟,贾永清;鹅细小病毒分子生物学研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2002年06期
19 赵坤,张慧辉;鹅细小病毒感染的诊断与治疗[J];河北畜牧兽医;2000年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吕雪峰;吉凤涛;刘云志;苏双;;鹅细小病毒研究现状[A];低碳经济与科学发展——吉林省第六届科学技术学术年会论文集[C];2010年
2 傅秋玲;程龙飞;万春和;傅光华;施少华;陈红梅;刘荣昌;陈翠腾;陈珍;朱春华;黄瑜;;半番鸭胚中鹅细小病毒的分离鉴定及其基因组分子特征分析[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会论文集[C];2018年
3 陈宗艳;李传峰;刘光清;;鹅细小病毒VP3基因表达及其抗体检测ELISA方法的初步建立[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
4 刘洋;顾小雪;霍斯琪;刘玉良;王传彬;;实时荧光定量TaqMan-PCR检测鹅细小病毒方法的建立[A];第四届全国禽病分子生物技术青年工作者会议论文集[C];2015年
5 杨晶;唐熠;刁有祥;;鸭源新型鹅细小病毒荧光定量LAMP检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集[C];2018年
6 崔元;王建昌;李玉保;经美;张姗;陈萍;孙继国;袁万哲;;鸭短喙-侏儒综合征及其病原的初步研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第五次学术研讨会论文集[C];2016年
7 肖世峰;陈仕龙;程晓霞;林锋强;王劭;朱小丽;俞博;黄梅清;郑敏;陈少莺;俞伏松;;短喙矮小综合征鹅细小病毒对不同水禽的致病性研究[A];福建省畜牧兽医学会2017年学术年会论文集[C];2017年
8 许云华;张伟娟;林燕青;李厚达;朱国强;;表达鹅细小病毒VP3结构蛋白重组乳酸乳球菌的构建[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
9 杨晶;唐熠;刁有祥;;鸭源新型鹅细小病毒感染性克隆的构建及病毒拯救[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第六次学术研讨会论文集[C];2018年
10 段进坤;王建业;朱国强;;鹅细小病毒强弱毒株感染性克隆的构建及毒力减弱机制的探索[A];中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 赵丽荣;鹅细小病毒结构蛋白基因遗传进化分析及其基因免疫研究[D];东北农业大学;2006年
2 丁轲;鹅细小病毒VP3基因与鹅白细胞介素-2基因分泌性融合表达载体的构建及在乳酸杆菌中表达的研究[D];四川农业大学;2006年
3 于天飞;鹅细小病毒非结构和结构蛋白B细胞线性抗原表位区的筛选[D];东北农业大学;2007年
4 李雪梅;鹅细小病毒和番鸭细小病毒部分基因组克隆、序列分析及VP2-VP3基因的表达[D];中国人民解放军军需大学;2001年
5 孟繁兴;鹅细小病毒非结构蛋白NS1与鹅胚成纤维细胞蛋白互作的研究[D];吉林农业大学;2015年
6 鲜思美;水禽重要疫病的多重PCR与基因芯片检测技术研究[D];四川农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨一鸣;鹅细小病毒强毒株筛选及病毒样颗粒疫苗的初步评价[D];吉林农业大学;2019年
2 张欣欣;鸭源新型鹅细小病毒分离鉴定与荧光定量PCR检测方法的建立[D];山东农业大学;2019年
3 刘晋宇;YBLJ株鹅细小病毒感染雏鹅动物模型及免疫组化方法的初步建立[D];延边大学;2019年
4 曹旭阳;新型鹅细小病毒VP3蛋白的原核表达及荧光定量PCR检测方法的建立[D];内蒙古师范大学;2019年
5 姜萌;鹅细小病毒的分离鉴定及LAMP快速检测方法的建立[D];吉林农业大学;2018年
6 汪建华;鹅细小病毒VP3基因的变异分析及TAG13毒株在细胞传代的研究[D];山东农业大学;2018年
7 孙大鹏;检测新型鹅细小病毒抗体的间接ELISA方法的建立及应用[D];山东农业大学;2018年
8 李鹏飞;新型鹅细小病毒检测方法的建立及流行病学调查[D];山东农业大学;2018年
9 于相龙;鹅细小病毒单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析检测方法的建立[D];山东农业大学;2018年
10 王艳秋;鹅细小病毒Taq Man荧光定量PCR方法的建立及初步应用[D];延边大学;2017年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 华南农业大学兽医学院 张桂红 罗开健;一例鹅细小病毒病的诊治[N];江苏农业科技报;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978