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哈蟆油非水溶性成分的药理活性研究

徐云凤  
【摘要】:目的:1、考察哈蟆油非水溶性成分(Non-water-soluble components,NWSC)的最佳酶解工艺。 2、研究哈蟆油NWSC及非水溶性成分酶解物(Hydrolysates of non-water-soluble components,HNWSC)的化学成分。 3、研究哈蟆油NWSC及HNWSC的药理活性。 方法:1、哈蟆油NWSC的酶解工艺研究 以黏度为指标,通过单因素试验及L9(34)正交试验,考察酶用量、酶解温度、酶解时间对哈蟆油NWSC黏度的影响,确定哈蟆油NWSC最佳酶解工艺。 2、哈蟆油NWSC及HNWSC的化学成分研究 运用聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶色谱,对哈蟆油非水溶性成分酶解前后的分子量进行分析;采用柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定哈蟆油NWSC及HNWSC中氨基酸的含量。 3、哈蟆油NWSC及HNWSC的降血脂作用 通过给正常大鼠饲喂高脂饲料,建立高脂大鼠模型,将实验大鼠随机分为基础饲料对照组、高脂模型组、NWSC(低、中、高剂量)组及HNWSC(低、中、高剂量)组,连续灌胃给药30天,测定各组大鼠的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等含量。 4、哈蟆油NWSC及HNWSC的抗疲劳作用 采用碱性蛋白酶酶解法制备哈蟆油非水溶性成分酶解物。以哈蟆油NWSC及HNWSC的低、中、高剂量组对小鼠进行连续灌胃给药30天,空白对照组给予等体积蒸馏水,分别观察小鼠负重游泳时间、血清尿素氮含量、肝糖原含量、血乳酸含量等指标的变化。 5、哈蟆油NWSC及HNWSC的耐缺氧作用 设立哈蟆油NWSC及HNWSC的低、中、高剂量组和空白对照组,连续灌胃30天,测定小鼠的常压耐缺氧时间、亚硝酸钠中毒存活时间、急性脑缺血性缺氧存活时间。 6、哈蟆油NWSC及HNWSC的抗氧化作用 给正常小鼠腹腔注射D-半乳糖100 mg/kg,每日一次,连续造模6周,将实验小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、NWSC(低、中、高剂量)组及HNWSC(低、中、高剂量)组,连续灌胃给药30天,观察各组小鼠肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)三个抗氧化指标的变化。 结果:1、研究表明,哈蟆油NWSC最佳酶解工艺为:酶用量250 u/g,酶解温度65℃,酶解时间60 min。 2、哈蟆油NWSC的分子量很大,酶解后的分子量显著下降;由高效凝胶色谱图可知哈蟆油NWSC酶解的比较完全;酶解前后的氨基酸含量没有显著变化。 3、哈蟆油NWSC能显著降低高脂血症(HLP)大鼠TG含量(P0.05);高剂量组能显著降低HLP大鼠TC含量(P0.05),对HDL-C含量无明显影响。 哈蟆油HNWSC能显著降低HLP大鼠TG及TC含量(P0.05),对HDL-C含量无明显影响。 4、哈蟆油NWSC中剂量组小鼠的游泳时间明显长于对照组(P0.05);各剂量组小鼠肝糖原含量均明显高于对照组(P0.05);中、高剂量组小鼠运动后的血乳酸曲线下面积均小于对照组(P0.05);各剂量组小鼠运动后血清尿素氮含量无明显改变。 哈蟆油HNWSC中剂量组小鼠负重游泳时间与对照组比较时间显著延长(P0.05),低剂量组肝糖原与对照组比较含量显著增加(P0.05),各剂量组血乳酸曲线下面积与对照组比较显著减小(P0.01),各剂量组血清尿素氮含量与对照组比较均无显著性差异(P 0.05)。 5、哈蟆油NWSC各剂量组的常压耐缺氧存活时间、亚硝酸钠中毒存活时间、急性脑缺血性缺氧存活时间与对照组比较均无显著性差异。 哈蟆油HNWSC各剂量组常压耐缺氧存活时间与对照组比较具有显著性差异,中、高剂量组亚硝酸钠中毒存活时间与对照组比较具有显著性差异,中剂量组急性脑缺血性缺氧存活时间与对照组比较具有显著性差异。 6、哈蟆油NWSC可降低肝组织中MDA指标,低剂量组可升高肝组织中GSH-Px活力,但不能提高肝组织中SOD活力。 哈蟆油HNWSC各剂量组可增加肝组织中GSH-Px、SOD的活力,降低肝组织中MDA含量。 结论:1、哈蟆油NWSC酶解后黏度由2325.50 mPa.s降为11.17 mPa.s,具有更好的流动性及溶解性。该酶解工艺简单、稳定、可行。 2、哈蟆油NWSC酶解后的分子量显著下降,酶解比较充分,酶解前后的氨基酸组成相同,氨基酸含量没有显著变化。 3、哈蟆油NWSC及HNWSC均具有辅助降血脂作用,且酶解后作用进一步加强。 4、哈蟆油NWSC及HNWSC均具有抗疲劳作用,且酶解后作用更加明显。 5、哈蟆油NWSC无耐缺氧作用,酶解后产物具有显著的耐缺氧作用。 6、哈蟆油NWSC抗氧化作用不明显,哈蟆油HNWSC具有抗氧化作用。


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