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人参皂苷单体及其与其他中药单体联合应用对细菌生物膜抑制作用的研究

董春雷  
【摘要】:目的:进一步完善大肠杆菌和金黄色葡萄球菌细菌生物膜模型,建立完善的细菌生物膜模型方法;考察具有抗菌作用的中药单体及人参总皂苷对细菌生物膜的作用;筛选出对细菌生物膜具有较强抑制作用的人参皂苷单体,并考察其与中药单体联合应用对细菌生物膜的影响。方法:利用扫描电子显微镜及激光共聚焦显微镜观察细菌生物膜的形成及形态;以大肠杆菌及金黄色葡萄球菌生物膜为筛选模型,将中药单体、人参总皂苷、各人参皂苷等物质与细菌及细菌生物膜共同培养,通过酶标仪读取的OD值来测定细菌及生物膜的生长能力,通过计算抑菌率来观察各样品对细菌及生物膜的抑制作用的大小;采用微量肉汤稀释法筛选与人参皂苷单体联合用药对细菌及生物膜产生影响的其他中药单体。结果:通过扫描电子显微镜(SEM)及激光共聚焦扫描电子显微镜(CLSM)镜下观察的结果,确定大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在培养24h时,形成生物膜;人参总皂苷对大肠杆菌抑制率最高达87.70%,对大肠杆菌BBF抑制率最高达69.65%,对大肠杆菌具有很强的抑制作用,对金黄色葡萄球菌及BBF有一定的抑制作用,但抑制作用较弱;人参单体皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc及Rd对大肠杆菌及BBF均有很强的抑制作用;其中Rc对大肠杆菌抑制率最高,可达86.68%;Rd对大肠杆菌BBF抑制率最高,可达60.59%;联合用药结果显示:Rb2与阿魏酸联合应用,对大肠杆菌及BBF产生一定协同抑制作用。结论:通过SEM和CLSM实验,进一步完善了细菌生物膜模型;通过中药单体对BBF的作用,进一步验证了细菌生物膜模型作为筛选慢性感染性药物模型的可行性。筛选出对BBF具有较强抑制作用的人参皂苷单体;并与阿魏酸联合应用对大肠杆菌BBF产生一定的协同抑制作用,这为下一步人参及人参与其它药物联合应用,治疗慢性感染性疾病的深入开发研究,打下良好的基础,并提供科学的依据。


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