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东北三省当归属中药资源研究与药理活性评价

张露云  
【摘要】:目的:通过研究东北当归属的六种植物,建立起形态鉴别方法和分子鉴别方法,为准确地鉴别这些植物提供科学依据。通过系统地研究黑水当归根和兴安白芷根不同溶剂提取物的TPC、TFC和TCC及抗氧化活性,还有黑水当归根、朝鲜当归根及兴安白芷根的挥发油成分及生物活性,为它们的开发与利用奠定基础。方法:采集6种当归属植物,通过与《中国植物志》的描述进行比对来对其形态特征进行描述。通过DNA条形码鉴定进行序列筛选。通过回流提取法得到植物的各层提取物,并应用分光光度法测定其TPC、TFC和TCC。应用DPPH,ABTS,FRAP,CUPRAC,胡萝卜素漂白等方法评价了各层提取物的抗氧化活性,运用MTT法评价了提取物的细胞毒性。应用GC-MS联用技术分析植物挥发油,应用?-葡萄糖苷酶和?-淀粉酶评价提取物的降糖活性,应用乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶评价提取物的抗胆碱酯酶活性。结果:通过形态比对确认了6种当归的形态特征。通过DNA条形码研究,确定了ITS2序列能达到最佳的鉴定效果。对黑水当归根系统地提取后得到了七种溶剂提取物。实验结果显示甲醇层具有最高的TPC和TFC,水层具有最高的TCC。甲醇和乙醇层在表现出高的DPPH和ABTS清除能力的同时,在FRAP和CUPRAC实验中亦表现出强还原能力。氯仿和水层表现出较好的羟基自由基清除能力。乙酸乙酯层可有效预防β-胡萝卜素漂白和细胞氧化损伤。水和甲醇层表现出较低的细胞毒性。对兴安白芷根提取物实验研究结果显示甲醇层具有最高的TPC,丙酮层具有最高的TFC。在抗氧化活性研究中,甲醇层表现出高的DPPH清除能力和铁离子还原能力,丙酮层表现出高的ABTS清除能力,乙醇层表现出强的铜离子还原能力。己烷层可有效预防β-胡萝卜素漂白。应用GC-MS技术对黑水当归、朝鲜当归和兴安白芷根的挥发油分别进行了成分分析,依次鉴定出38种、71种、72种化学成分。活性实验结果显示黑水当归根与朝鲜当归根挥发油具有一定的抗氧化与降糖活性。结论:通过对东北当归属植物的形态鉴定,总结得到了每种植物有效的鉴别特征。从分子水平上对6种东北当归属植物采用4个片段对DNA条形码序列进行系统评估,IST2片段在东北当归属物种鉴定中起到关键性作用。对黑水当归根和兴安白芷根的系统研究表明,其各层提取物均具有一定的生物活性。从黑水当归根、朝鲜当归根及兴安白芷根的挥发油中分别鉴定出了38种、71种和72种化学成分。对黑水当归根和朝鲜当归根挥发油的生物活性研究显示,两种挥发油均具有一定的抗氧化活性,较好的?-葡萄糖苷酶抑制活性。这为它们的研究开发与综合利用提供了详实的数据。


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