哈蟆油HPLC指纹图谱的研究及其在真伪鉴别中的应用

【摘要】： 本课题“哈蟆油HPLC指纹图谱的研究及其在真伪鉴别中的应用”是哈蟆油系统质量控制方法中的一部分，是对现有哈蟆油质控方法的必要补充。旨在通过高效液相色谱法对哈蟆油样品进行研究，建立哈蟆油HPLC指纹图谱的共有模式，达到有效控制其质量的目的。本实验共收集到了18批待研究样品，其中正品哈蟆油15批，伪品哈蟆油(即青蛙与蟾蜍的输卵管)3批。通过系统溶剂法对正品哈蟆油进行提取，从中选择了95％乙醇作为哈蟆油HPLC指纹图谱研究的提取溶剂；结合紫外全波长扫描和试验的结果，我们选择了209nm作为检测波长；经过对大量流动相系统的考察，确定了乙腈—0.5％磷酸水溶液为其流动相，采取非线性的梯度洗脱。最后确定哈蟆油HPLC指纹图谱的色谱条件为：色谱柱：Kromasil C18(5μ100A TiANHE(?) TH 1025 250mm×4.6mm S／N:06L25514)；流动相：乙腈—0.5％磷酸水溶液；柱温：室温；检测波长：209nm；进样量为15μl。在已筛选的色谱条件下，35分钟内就完成了哈蟆油HPLC指纹图谱的检测。用此方法对其余样品分别测定，并应用指纹图谱相似度评价系统软件对各样品图谱信息进行处理，最后选出11批优质正品哈蟆油样品生成哈蟆油HPLC指纹图谱共有模式，从中选出12个重复性好的色谱峰作为哈蟆油HPLC指纹图谱的特征峰。将生成的对照指纹图谱与伪品哈蟆油HPLC图谱进行比较，即可判断出真伪。经方法学验证，表明该方法具有良好的专属性、准确度、精密度、重复性、稳健性，测定范围在25μg／ml～100μg／ml之间。并以相似度大于0.85作为判定哈蟆油药材合格与否的标准。本实验不仅建立了哈蟆油的HPLC指纹图谱，而且还首次成功地利用该方法对哈蟆油的真伪进行了鉴别，能够有效的监测哈蟆油的质量，作为其质量控制的手段，为名贵动物药哈蟆油的开发和利用奠定了基础。