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20-HETE通过促进δPKC向线粒体移位诱导心肌细胞凋亡

赵欢  
【摘要】:20-羟二十烷四烯酸(20-hydroxyeicosatetraenoic acid,20-HETE)是细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)ω-羟化酶催化花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢所生成的产物。本实验室的前期研究结果显示20-HETE通过PKC途径诱导乳鼠心肌细胞的凋亡反应,此外有研究表明用PKC激活剂PMA诱发PKC-的膜转位,细胞凋亡数明显增加,但是20-HETE是否通过PKC-诱导乳鼠心肌细胞凋亡还有待研究。本研究发现20-HETE诱导的心肌细胞凋亡是通过诱导PKC-从细胞质向线粒体移位,随后激活了线粒体凋亡信号通路而形成的。方法及结果如下:(1)通过流式细胞仪技术检测发现, PKC抑制剂-卡马拉素能够显著抑制由20-HETE引起的心肌细胞凋亡率的提高。与对照组相比,20-HETE (50nM)处理的心肌细胞凋亡明显增加,凋亡比率约达到24.68%±4.8%,同时与20-HETE相比,加20-HETE之前卡马拉素处理(5μM)15分钟明显增加了活细胞率,凋亡比率约为11.57%±7.1%,但是等量的卡马拉素不改变凋亡或活体细胞的比例(2)通过RT-PCR的方法对PKC的mRNA的表达进行了检测,与对照组细胞相比,20-HETE处理组PKC的mRNA表达明显增加,约为52.4%±3.23%(3)利用免疫荧光技术发现加入20-HETE后促进了PKC由细胞质向线粒体的移位。上述研究均表明20-HETE诱导的心肌细胞凋亡是通过诱导PKC-从细胞质向线粒体移位,随后激活了线粒体凋亡信号通路而形成的,为寻找治疗心脏疾病的新药物提供理论依据。


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